细胞培养

  简介:

  细胞培养是采用无菌操作的方法,模拟动物体内的生理条件,在体外进行培养.使其不断地生长、繁殖,从而观察细胞的增殖、分化以及细胞衰老等过程的生命现象。常见的细胞培养方式可分为贴壁和悬浮两种。细胞培养的常规操作包括:1)细胞的接种和传代;2)细胞计数;3)细胞的复苏和冻存。

  常见的细胞照片:

细胞培养

  常用的细胞培养基:

名称 成份 适用细胞类型 备注
MEM BSS+12种氨基酸+谷氨酰胺+8种维生素 各种传代细胞系和原代细胞 在此基础上改良的培养基有BEM、DMEM
DMEM 改良自MME,各成分量加倍 贴附型肿瘤细胞,CHO细胞 分低糖(5.5mM)、高糖(25mM)型,高糖型较常用
RPMI-1640 BSS+21种氨基酸+维生素11种等 悬浮细胞,正常细胞,肿瘤细胞 最初针对淋巴细胞设计
L15 半乳糖替代了葡萄糖;磷酸盐缓冲体系 快速增殖瘤细胞,CO2缺乏 以半乳糖代替了葡萄糖
McCoy5A BSS+40种成分 原代细胞,淋巴细胞,组织活检细胞 最初为肉瘤细胞设计
DMEM/F12 高浓度与成分多样化 原代培养及更难养的细胞系 F12与DMEM等体积混合,可作为开发无血清培养基的基础配方

  细胞培养方法:

  1、完全培养基配置:培养基的配制(需在超净台内无菌操作):10%FBS+90%培养基(根据细胞的种类分为DMEM/F12、DMEM/HIGH、MEM/EBSS、改良型RPMI-1640培养基)。

  2、细胞复苏:1. 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。 2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。 3. 把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的培养瓶中前后左右轻轻摇动,使培养瓶中的细胞均匀分布。 4. 标好细胞种类和日期等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。 5. 3天换一次培养基。

  3、细胞传代:1. 培养瓶中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。 2. 把原有培养基吸掉。3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。 4. 细胞都变圆后吸出胰酶 终止消化。 5.加入20ml的完全培养基,移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。 6.根据细胞种类把细胞传到几个培养瓶中。一般,癌细胞分4个,正常细胞传3个。继续培养。

  4、细胞冻存:把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃过夜,然后放到液氮罐中保存。 冻存液的配制: 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。

  样本寄送须知:

  1.活细胞:一定要不透气方瓶寄,常温;

  2.冻存细胞:纯干冰件,保证干冰充足

  细胞培养环境展示:

细胞培养

  倒置显微镜和CO2细胞培养箱

细胞培养

  细胞计数仪

细胞培养

  液氮罐

细胞培养

  超净工作台

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