细胞培养

　　简介：

　　细胞培养是采用无菌操作的方法，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养.使其不断地生长、繁殖，从而观察细胞的增殖、分化以及细胞衰老等过程的生命现象。常见的细胞培养方式可分为贴壁和悬浮两种。细胞培养的常规操作包括：1)细胞的接种和传代;2)细胞计数;3)细胞的复苏和冻存。

　　常见的细胞照片：

　　常用的细胞培养基：

　　细胞培养方法：

　　1、完全培养基配置：培养基的配制(需在超净台内无菌操作)：10%FBS+90%培养基(根据细胞的种类分为DMEM/F12、DMEM/HIGH、MEM/EBSS、改良型RPMI-1640培养基)。

　　2、细胞复苏：1. 把冻存管从液氮中取出来，立即投入37℃水浴锅中，轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。 2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。 3. 把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的培养瓶中前后左右轻轻摇动，使培养瓶中的细胞均匀分布。 4. 标好细胞种类和日期等，放到CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。 5. 3天换一次培养基。

　　3、细胞传代：1. 培养瓶中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。 2. 把原有培养基吸掉。3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。 4. 细胞都变圆后吸出胰酶 终止消化。 5.加入20ml的完全培养基，移液枪吹打细胞，把细胞都悬浮起来。 6.根据细胞种类把细胞传到几个培养瓶中。一般，癌细胞分4个，正常细胞传3个。继续培养。

　　4、细胞冻存：把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞种类，冻存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮罐中保存。 冻存液的配制： 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，边滴边摇。

　　样本寄送须知：

　　1.活细胞：一定要不透气方瓶寄，常温;

　　2.冻存细胞：纯干冰件，保证干冰充足

　　细胞培养环境展示：

　　倒置显微镜和CO2细胞培养箱

　　细胞计数仪

　　液氮罐

　　超净工作台