ATP染色

染色 7340

  一、实验器材及试剂

  1、实验器材

名称 厂家 型号
冰冻切片机 Thermo CRYOSTAR NX50
切片刀 上海徕卡仪器有限公司 LEICA 819
防脱载玻片 haokebio  
正置光学显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse E100
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

  2、主要实验试剂:
 

试剂名称 厂家 货号
OCT包埋剂 Sakura 4583
Tris碱 Sigma V900483
氯化钙 国药集团化学试剂有限公司 10005860
ATP钠盐 Solarbio 615B025
盐酸 国药集团化学试剂有限公司 10011008
硝酸钴 国药集团化学试剂有限公司  
硫化铵 国药集团化学试剂有限公司 81001460
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司 10023418
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司 100092683

 

  二、染色步骤

  1、工作液配制:Tris碱5g+氯化钙0.499g+蒸馏水定容至250ml,室温保存。‚取染液中合适的量,用盐酸调PH至10.4。ƒ取染液中合适的量,每10ml的量加15mg的ATP钠盐,充分溶解,调PH至9.4。

  2、工作液孵育:未经固定的新鲜组织冰冻切片自然晾干,PH10.4的工作液孵育5min,倾去孵育液,PH9.4的工作液孵育30min。

  3、CaCL2染色:倾去孵育液,CaCL2溶液处理3次,每次2min。

  4、硝酸钴染色:硝酸钴作用5min,流水冲洗5min。

  5、硫化铵染色:1%硫化铵溶液处理30s,流水冲洗5min。

  6、脱水封片:切片依次入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。

  7、显微镜镜检,图像采集分析。

 

  三、结果判读:

  Ⅰ型呈浅灰色或无色,Ⅱ型呈深灰或黑色,分型清楚。

 

  四、注意事项:

  1、切片一定要是新鲜组织的冰冻切片,不可以固定。

  2、Tris碱、氯化钙粉剂常温保存,硫化铵常温避光保存,ATP钠盐-20℃保存,其它染液4℃保存,使用前先复常温。

  3、工作液和1%硫化铵溶液要现配现用,不能保存。

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