【产品简介】

细胞凋亡中染色体 DNA 的断裂是个渐进的阶段性过程。染色体 DNA 首先在内源性的核酸

水解酶的作用下降解为 50-300 kb 的大片段，然后大约 30%的染色体 DNA 在 Ca 2+和 Mg 2+依赖

的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成 180-200 bp 核小体 DNA 多聚体。

因此在细胞凋亡晚期，DNA 会被降解为 180-200 bp 的片段，断裂的基因组 DNA 上暴露出大量

的 3′-OH 末端。末端脱氧核糖核苷酸转移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）

是一种不依赖于模板的 DNA 聚合酶，可以催化脱氧核苷酸结合到断裂的 DNA 分子 3′-OH 末

端。因此 TUNEL (TdT mediated dUTP Nick End Labeling)细胞凋亡检测试剂盒可以用来检测

组织细胞在凋亡晚期过程中细胞核 DNA 的断裂情况。其原理是在 TdT 酶的作用下，在基因组

DNA 断裂时暴露出的 3´-OH 末端掺入生物素标记的 dUTP（Biotin-dUTP），随后用辣根过氧化

物酶（Horse-radish peroxidase，HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin）(Streptavidin-HRP,

SA-HRP)，检测被生物素（Biotin）标记的 DNA 末端，最后通过加入 HRP 的底物混合液（DAB）

进行显色反应，使得凋亡细胞的细胞核被染成棕黄色，从而可以用普通光学显微镜检测。本试

剂盒可适用于石蜡组织切片的细胞凋亡检测。

【储存与运输】

冰袋运输，-20˚ C 储存，可稳定储存一年。

【试剂组成】

【使用方法】

石蜡切片荧光 tunel 实验步骤

石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水

乙醇Ⅱ5min，取出置于通风厨内等酒精晾干后放入自来水中稍洗，蒸馏水洗。(冬天应提高脱蜡

温度或适当延长脱蜡时间）

通透：PH6.0 柠檬酸修复液中火修复 8min ，室温冷却，用免疫组化笔划圈，之后纯水洗三

次(重要)。（通透方式有多种：1 蛋白酶消化，2tritonx100 通透剂通透，柠檬酸修复）

配试剂工作液以及孵育：荧光反应液（白光 tunel 反应液）和 TdT 酶按 50:1 比例混合，此

液为 tunel 工作液，，将 tunel 工作液加入到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃恒温箱

孵育 30min 到 2 小时（具体需要预实验），湿盒内加少量水保持湿度。

白光 tunel，按以下操作：HRP 二抗孵育以及 DAB 显色：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色

摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min，然后 HRP 二抗工作液室温孵育 25min（HRP 二抗工作液，

Streptavidin-HRP：PBST=1:1000），；玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，

每次 5min；DAB 反应液（客户自备）显色;酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。

封片：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min。切片稍甩干后用

抗荧光淬灭封片剂封片。

镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长 330-380nm，

发射波长 420nm；FITC 绿光激发波长 465-495nm，发射波长 515-555 nm；CY3 红光激发波长

510-560，发射波长 590nm）

石蜡切片白光 tunel 结果判读 白光 tunel 阳性表达为黄色至棕黑色，正常细胞为蓝色。

【注意事项】

1. 本试剂仅供科研。

2. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。