【使用方法】

动物 EdU 注射

对于小鼠，可以按照 10-200mg/kg 的用量，把 EdU 用 PBS 配制成一定浓度，腹腔注射、特定组 织或器官局部注射或者加入饮用水中。具体用量跟所用动物的种类、体重和使用方式有关，可 以参考相关文献，因此初次使用时建议对 EdU 的使用浓度进行一定的摸索，或者直接使 50mg/kg 的浓度进行测试。

注射方式:依据客户实验而定，如腹腔注射，皮下注射，肌肉注射，尾静脉注射等，其中以腹腔 注射为多。6 小时后或根据特定实验确定适当的时间后，快速处死小鼠，取出所需组织，按照 常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。EdU 标记的时候也可参考相关文献自行调整。建议任何实 验均可取小肠组织检测细胞增殖情况，小肠上皮组织细胞增殖快，成年小鼠 EdU 注射 6 小时后 即可检测到阳性信息，可用作阳性对照进行预实验。

切片处理

切片前处理：组织器官最好进行清洗，以去除血液、组织中残留的EdU，降低背景。

切片厚度：3-10μm 为宜，切片过厚可能会影响切片背景。

切片后处理：

石蜡切片脱蜡：二甲苯脱蜡 2 次，15 分钟/次，乙醇梯度 (100%，95%，85%，75%) 洗脱各一次， 5 分钟/次，去离子水洗脱 1 次。

冰冻切片处理：室温放置 30 分钟后，固定 10 分钟，PBS 清洗 3 次，每次 5 分钟。

Edu 反应

按照 PB:CU:粉色色原：AC=860:40:1:100 的比列配制 EdU 反应液。  (反应液现配现用)

每片组织滴加 50-100 μl 的 EdU 染色反应液，室温避光孵育 15 分钟，弃染色反应液，PBS 冲洗 3 次，每次 5 分钟。

其他染色

客户可以根据需要进行细胞表面或者细胞内抗原染色。

DAPI 染色

每片组织加入 50-100ul DAPI 染色液，染色 15 分钟，PBS 洗脱三次，每次 5 分钟。

图像拍照

染色完成后建议立刻观察，使用荧光显微镜或共聚焦显微镜采集图像，本试剂盒荧光染料 AF647 对应的光谱特性为 Ex/Em：656 nm/670 nm  (粉色) ；DAPI 染色液对应的光谱特性为 Ex/Em：

358 nm/461 nm (蓝色) 。

【注意事项】

1. 对于体外培养细胞，具体 EdU 使用浓度、孵育时间随样品以及研究目的的不同，可进行 适当调整。

2. 部分组织细胞增殖速度缓慢，为了排除造模效果不佳等因素，建议选增殖快的组织样品作 为参照样本 (如肠道组织)

3. 如果背景颜色过深，可能是实验中洗涤不充分、组织样品固定时间过长、固定液残余导致。

4. 催化剂 AC 颜色发生轻微变化，点击反应催化体系依旧能够正常进行，如呈现棕色，表明 该组分已失效，请弃用。

5. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。