BCA蛋白定量试剂盒

WB 产品 6200
BCA蛋白定量试剂盒

BCA蛋白定量试剂盒

组织病理学中,组织必须先经过及时有效的固定才能完成随后的包埋及切片。
  • 价格¥350
  • 规格500次
  • 货号HKW2019
  • 单位
  • 品牌HaoKebio

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HaoKebioHKW2019BCA蛋白定量试剂盒500次¥350

【产品简介】

BCA 法定量检测蛋白的基本原理是基于双缩脲反应,即在碱性条件下,Cu2+被蛋白质还原 成 Cu+,随后 Cu+与 BCA (Bicinchonic acid,  一种显色剂) 发生螯合反应,每两分子 BCA 螯 合一个 Cu+,生成紫色的水溶性复合物,该物质在 562 nm 处有最高吸收值,且颜色深浅与蛋 白质浓度一定范围内成正比,因此可用于蛋白质的定量检测,蛋白浓度在 50-2000 μg/mL 浓 度范围内有较好的线性关系。
本方法不受绝大部分样品中化学物质的影响,可以兼容样品中高浓度的去垢剂,包括浓度 高达 5%的 SDS,5%的 Triton X-100,5%的 Tween-20、60、80 等。但螯合剂和高浓度还原剂 会影响检测结果,需确保样品中无 EGTA,EDTA 浓度低于 10 mM,DTT 低于 1 mM, β-巯基乙 醇低于 1 mM。

【储存与运输】

冰袋运输;蛋白标准品 (BSA) 4℃保存,有效期 12 个月。配制成的蛋白标准溶液后需 -20℃ 保存,并在 6 个月内使用。其余试剂常温保存,有效期 12 个月。

【使用方法】

1. 配制蛋白标准贮备液:取 1 mL 蛋白标准配制液加入到蛋白标准品 (BSA) 蛋白标准管

中,将 25 mg 蛋白标准品完全溶解,即得到浓度为 25 mg/mL 的蛋白标准贮备液。配制成的蛋 白标准溶液可-20℃ 长期保存。

2. 配制蛋白标准工作液:取适量 25 mg/mL 蛋白标准贮备液,用 PBS 或生理盐水稀释 50

倍,得到终浓度为 0.5 mg/mL 的蛋白标准工作液。注意稀释时按照 10 倍梯度方法稀释,确保 稀释准确。

3. 绘制标准曲线 (酶标仪法) :将蛋白标准工作液分别按 0,1,2,4,8,12,16,20 μ L 加到 96 孔 板中,然后用 PBS 或生理盐水依次加 20,19,18,16,12,8,4,0 μL 将上 述梯度工作液补足到 20 μL。得到蛋白浓度依次为 0,25,50,100,200,300,400,500 μ g/mL 的梯度曲线。

4. 准备待测样品:将待测的蛋白样品进行适当稀释 (可通过预实验检测,使样品蛋白浓度 在标准曲线范 围内,确保检测结果可信) ,按照每个样品 20 μL 的量加到 96 孔板中。待测 样品与蛋白标准品用相 同溶液稀释。

5. 配制 BCA 显色工作液:将 BCA 试剂与硫酸铜溶液按照 50:1 体积比充分混合均匀, 得到 BCA 显色工作液。BCA 显色工作液可室温保存,24 h 内使用。每个待测样品需 200 μL ,建议按需配制,避免浪费。

6. 检测:向标准曲线样品孔及待测样品孔中每孔加入 BCA 显色工作液 200 μL,充分混 匀 (可将 96 孔板放在振荡器上振荡 30 s) ,37℃反应 30 min 后,以标准曲线 0 号做参比 ,在 562 nm 波长下比色测定,  记录各孔吸光度值。  (注:也可以在室温反应 2 h,或 60℃ 反应 30 min。如果蛋白浓度较低,建议置 于 60℃反应)

7. 计算:以标准曲线中梯度蛋白含量 ( μg/mL) 为横坐标,吸光值为纵坐标,绘出标准 曲线。根据所测 样品的吸光值,在标准曲线上即可查得相应孔中待测样品的蛋白浓度 ( μg/mL ) ,再乘以样品稀释倍数即为待测样品实际蛋白浓度。议按需配制,避免浪费。

【注意事项】

1.BCA 法测定蛋使用 BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深,并且显色 反应的速度和温度有关,因此需注意保持定时和定温,以确保精确定量,若显色反应时间和温 度无法精确控制,宜每次都做标准曲线。

2.在进行蛋白标准贮备液的配制时,需确保溶解充分。稀释配制蛋白标准工作液时建议 10 倍梯度稀释,  不要一次稀释 50 倍,以免产生较大误差。

3.低温或长期保存,若发现 BCA 试剂 A 或者试剂 B 有沉淀发生。请 37ºC 温育并伴随搅 拌促使其充分溶解。如发现细菌污染,则应舍弃,避免对实验结果造成影响。

4. 操作时请穿实验服,并佩戴一次性手套。

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