【使用方法】

石蜡切片荧光tunel实验步骤

石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯 Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇 Ⅰ5min-无水 乙醇Ⅱ5min，取出置于通风厨内等酒精晾干后放入自来水中稍洗，蒸馏水洗。(冬天应提高脱蜡 温度或适当延长脱蜡时间)

通透：pH6.0 柠檬酸修复液中火修复8min ，室温冷却，用免疫组化笔划圈，之后纯水洗三 次(重要)。  (通透方式有多钟：1 蛋白酶消化，2tritonx100 通透剂通透，柠檬酸修复)

配试剂工作液以及孵育：荧光反应液和 TdT 酶按 50:1 比例混合，此液为 tunel 工作液，， 将 tunel 工作液加入到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃恒温箱孵育 1 到 2 小时，湿盒 内加少量水保持湿度。

DAPI 复染细胞核：切片用 PBS (PH7.4) 洗涤 3 次，每次 5min。去除 PBS 后在圈内滴加 DAPI 染液，避光室温孵育 10min。

封片：玻片置于 PBS (PH7.4) 中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次5min。切片稍甩干后用 抗荧光淬灭封片剂封片。

镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。

石蜡切片荧光tunel结果判读

DAPI 染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，试剂盒为 AF488 标记，阳性凋亡细胞核为绿 色。

【注意事项】

1. 本试剂仅供科研。

2. 操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。