BRDU检测(DAB)

分子病理服务 554
BRDU检测(DAB)

BRDU检测(DAB)

荧光实验单标以及双标,预实验按正式实验正常收费,增加荧光放大(TSA)费用
  • 价格¥45
  • 货号HKF2035
  • 单位
  • 品牌浩克

产品介绍
产品参数
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【产品信息】

产品名称产品货号规格价格
BRDU检测(DAB)HKF203545元

一、 实验原理
免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(IHC)或免疫细胞化学技术(ICC)。
二、 实验步骤
1. 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -无水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min,自来水洗2min。
2. 抗原修复:组织切片置于盛满xxxx抗原修复缓冲液(PH )的修复盒中于微波炉内进行抗原修复,中火8min至沸,停火8min保温再转中低火7min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4
)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
3. 阻断内源性过氧化物酶:切片加上3%的双氧水,室温孵育25min,将玻片置PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
4. 画圈:用组化专用的组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈,然后加入足量的PBS保证后续依次加入的封闭血清,一抗,二抗,以及显色剂能完全覆盖组织,而不沿着玻片流走。
5. 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织,室温封闭30min。
6. 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按一定比例配好的对应一抗,切片平放于湿盒4°过夜孵育。
7. 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加相对应的二抗覆盖组织,室温孵育50min。
8. DAB显色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加(稀释液和浓缩液1000:50配制)新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间,阳性为棕黄色,纯水冲洗切片终止显色。
9. 复染细胞核:苏木素染色2-3min左右,自来水洗,分化液分化2秒,自来水冲洗,返蓝液返蓝15-30s,流水冲洗。
10. 脱水封片:将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -无水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片.
11. 显微镜镜检,图像采集分析。
三、 结果判读:
苏木素染出细胞核为蓝色,DAB显出的阳性表达为棕黄色
四、 注意事项:
1. 注意切片脱蜡是否彻底;
2. 实验过程中切片勿干片;
3.   实验操作中小心枪头挂伤组织。
 

暂无

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