TUNEL白光/荧光

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TUNEL白光/荧光

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  • 价格¥100
  • 单位
  • 货号HKF2038
  • 品牌浩克

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【产品信息】

产品名称产品货号规格价格
TUNEL白光/荧光HKF2038100元

一、 实验原理
当细胞凋亡时, 染色体DNA双链断裂而产生大量的粘性3′-OH末端,可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下,将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的
3′-末端,从而可进行凋亡细胞的检测(TUNEL法)。
二、石蜡切片荧光tunel 实验步骤
1、脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ12 min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min-95%酒精6min-85%酒精6min-蒸馏水洗2min。 
2、微波修复:切片放入装满柠檬酸抗原修复液(6.0) 的修复盒中,微波修复中火8min后置于室温自然冷切,双蒸水洗涤
3次,每次5min。
3、组织画圈:切片稍干后沿着组织用组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈,画完后用纯水洗涤
3次,每次5min。
4、 加试剂: 按1:50比例混合配制tunel工作液,TdT酶1ul+对应颜色反应液50ul混合均匀;将tunel工作液加入到圈内覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃恒温箱孵育1.5小时,湿盒内加少量水保持湿度。(浓度和孵育时间可以根据实验结果进行调节)。
5、DAPI染核:切片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。吸干圈内多余PBS再滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。
6、封片:切片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。将切片取出后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7、镜检拍照:将切片置于荧光显微镜下观察并采集图像。
(DAPI紫外激发波长361-389nm,发射波长420nm,发蓝光;FITC激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3激发波长540-580,发射波长594nm,发红光)。
三、 结果判读
   DAPI染出的细胞核在紫外的激发下为蓝色,tunel试剂盒为绿色荧光素标记,阳性凋亡细胞核为绿光。

 一、 石蜡切片DABtunel实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -无水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min,自来水洗2min。
2、 修复:组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复液(9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复,中火8min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于纯水中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
3、 加试剂:按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂TdT酶 和白光反应液,按1:100混合,加到圈内覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃恒温孵育1小时,湿盒内加少量水保持湿度。
4、 Hrp二抗孵育:切片用PBS(PH7.4)洗涤3次,每次5min。然后加hrp二抗工作液室温孵育30min,工作液浓度
hrp:pbst1:500,洗涤后DAB显色。
7、 复染细胞核:苏木素染色2-3min左右,自来水洗,分化液分化2秒,自来水冲洗,返蓝液返蓝15-30s,流水冲洗。
8、脱水封片:将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min –无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
二、 石蜡切片tunel结果判读
  苏木素染出来的细胞核为蓝色,试剂盒标记棕色为阳性凋亡细胞核。
 
 

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