TUNEL白光/荧光

2023年7月5日免疫组化/IHC 分子病理分子病理服务技术服务 5430

TUNEL白光/荧光

荧光实验单标以及双标，预实验按正式实验正常收费，增加荧光放大（TSA）费用

免疫组化/IHC 分子病理分子病理服务技术服务

价格￥100
货号HKF2038
单位张
品牌浩克

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【产品信息】

产品名称	产品货号	规格	价格
TUNEL白光/荧光	HKF2038	张	100元

一、 实验原理
当细胞凋亡时, 染色体DNA双链断裂而产生大量的粘性3′-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的
3′-末端，从而可进行凋亡细胞的检测（TUNEL法）。
二、石蜡切片荧光tunel 实验步骤
1、脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12 min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min-95%酒精6min-85%酒精6min-蒸馏水洗2min。
2、微波修复:切片放入装满柠檬酸抗原修复液(6.0) 的修复盒中，微波修复中火8min后置于室温自然冷切，双蒸水洗涤
3次，每次5min。
3、组织画圈：切片稍干后沿着组织用组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈，画完后用纯水洗涤
3次，每次5min。
4、 加试剂： 按1:50比例混合配制tunel工作液，TdT酶1ul＋对应颜色反应液50ul混合均匀；将tunel工作液加入到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃恒温箱孵育1.5小时，湿盒内加少量水保持湿度。(浓度和孵育时间可以根据实验结果进行调节)。
5、DAPI染核：切片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。吸干圈内多余PBS再滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
6、封片：切片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。将切片取出后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7、镜检拍照：将切片置于荧光显微镜下观察并采集图像。
（DAPI紫外激发波长361-389nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；CY3激发波长540-580，发射波长594nm，发红光）。
三、 结果判读
DAPI染出的细胞核在紫外的激发下为蓝色，tunel试剂盒为绿色荧光素标记，阳性凋亡细胞核为绿光。

一、 石蜡切片DABtunel实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -无水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min，自来水洗2min。
2、 修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复液(9.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于纯水中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、 加试剂：按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂TdT酶和白光反应液，按1:100混合，加到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃恒温孵育1小时，湿盒内加少量水保持湿度。
4、 Hrp二抗孵育：切片用PBS（PH7.4）洗涤3次，每次5min。然后加hrp二抗工作液室温孵育30min，工作液浓度
hrp：pbst1:500，洗涤后DAB显色。
7、 复染细胞核：苏木素染色2-3min左右，自来水洗，分化液分化2秒，自来水冲洗，返蓝液返蓝15-30s，流水冲洗。
8、脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min –无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
二、 石蜡切片tunel结果判读
苏木素染出来的细胞核为蓝色，试剂盒标记棕色为阳性凋亡细胞核。