杭州浩克生物
平板克隆形成实验
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【产品信息】
| 产品名称 | 产品货号 | 规格 | 价格 |
| IHC+普鲁士蓝（或其他化学染料） | HKF2034 | 张 | 200元 |
试剂配制
过氧化氢: 将 30%H2O2 用 0.01mol/LPBS 稀释为 0.003%
DAB 显色液 : DAB 染液：现配
2%亚铁氢化钾: 亚铁氢化钾 2g ，100ml 蒸馏水。
2%盐酸：盐酸 2ml ，蒸馏水 98ml。
实验步骤
1 、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min-95%Ⅱ6min-85%酒精 6min ，自来水洗，蒸馏水洗 3 遍。
2、普鲁士蓝染色：将 2%亚铁氢化钾和 2%盐酸等比例混合，切片入混合液中染色 30min， 蒸馏水洗 2 遍。
3、DAB 染色：DAB 显色液滴染约 5- 10min，显微镜下控制显色程度，倾去染液用 0.01mol/L 的 PBS 溶液浸洗 1 次，蒸馏水洗 3 次
4 、染核：苏木素染色 2-3min ，自来水洗，盐酸水溶液分化2s，自来水洗，氨水水溶液返蓝15-30s， 自来水洗。
5 、脱水封片：切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯 Ⅰ5min-二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。
6 、显微镜镜检，图像采集分析。
结果判读：
组织中含有铁元素的部位呈棕褐色，细胞核呈浅蓝色，背景呈浅棕色或无色。
注意事项：
1 、普鲁士蓝 DAB 染液要现配现用。
2 、切片染色前用蒸馏水洗干净，防止自来水中的铁离子在染色中反应，造成假阳性。
3 、在 DAB 的显色过程中，每隔约 5min 需要在显微镜下观察显色效果，由普鲁士蓝染出的 弱阳性(即浅蓝色)被 DAB 替代形成棕色或者无蓝色的部位变成棕色即可。
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