免疫组化双染

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免疫组化双染

免疫组化双染

荧光实验单标以及双标,预实验按正式实验正常收费,增加荧光放大(TSA)费用
  • 价格¥100
  • 货号HKF2003
  • 单位
  • 品牌浩克

产品介绍
产品参数
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【产品信息】

产品名称产品货号规格价格
免疫组化双染HKF2003100元
  • 实验原理

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术(IHC)或免疫细胞化学技术(ICC)。 

  • 实验器材及试剂

1.主要实验器材

名称厂家名称仪器编号
脱水机湖北贝诺医疗科技有限公司JT-12S
生物组织自动包埋机湖北贝诺医疗科技有限公司JB-L5
石蜡包埋机(冷台)湖北贝诺医疗科技有限公司JB-L5
转轮式切片机徕卡显微系统上海有限公司RM2016
KD-P组织摊片机浙江金华科迪仪器设备有限公司Z51A011
烤箱天津市莱玻特瑞仪器设备有限公司GFL125
微波炉美的M1-L213B
载玻片及盖玻片江苏汇达医疗器械有限公司710510    
脱色摇床上海琪特分析仪器有限公司STS-3
涡旋仪秒生科技有限公司SI-A256 
掌上离心机上海吉泰生物科技有限公司MC2
显微镜NIKONECLIPSE E100
组化笔Gene techGT1001
移液枪DragonKE003068

2.主要实验试剂

试剂名称厂家名称货号
无水乙醇杭州宏达化工仪器有限公司SJ003614
二甲苯国药集团化学试剂有限公司10023418
PBS缓冲液杭州浩克生物技术有限公司 
抗原修复液EDTA(9.0)杭州浩克生物技术有限公司HKI0004
BSA杭州浩克生物技术有限公司HK5021
组化试剂盒图凌杭州生物医药有限公司I20012C
一抗:xxx红+xxx棕   
二抗:超敏兔鼠通用二抗杭州浩克生物技术有限公司HKI0029
组化红色显色试剂盒杭州浩克生物技术有限公司HKI0007
苏木素染液杭州浩克生物技术有限公司HK5023
盐酸分化液杭州浩克生物技术有限公司HK5024                   
氨水水溶液返蓝液杭州浩克生物技术有限公司HK5025       
中性树胶国药集团化学剂有限公司10004160
  • 实验步骤
  • 石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -无水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min,自来水洗2min。
  • 抗原修复:组织切片置于盛满抗原修复液EDTA(9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复,中火8min至沸腾停火8min再转中低火7min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
  • 阻断内源性过氧化物酶:切片加上3%的双氧水,室温孵育25min,将玻片置PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
  • 画圈:用组化专用的组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈,然后加入足量的PBS保证后续依次加入的封闭血清,一抗,二抗,以及显色剂能完全覆盖组织,而不沿着玻片流走。
  • 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织,室温封闭30min。
  • 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒4°过夜孵育。
  • 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与超敏兔鼠通用二抗(HRP标记)覆盖组织,室温孵育50min。
  • 显色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加解冻的TY反应液反应20min,然后PBS洗三次,之后加入红色显色液工作液(PB:CU:红色色原:AC=860:40:1:100),显微镜下控制显色时间,阳性为红色,纯水冲洗切片终止显色。(时间较长15min左右),再重复2-7的操作步骤。
  • 抗原修复:组织切片置于盛满抗原修复液EDTA(9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复,中火8min至沸腾停火8min再转中低火7min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
  • 阻断内源性过氧化物酶:切片加上3%的双氧水,室温孵育25min,将玻片置PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
  • 画圈:用组化专用的组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈,然后加入足量的PBS保证后续依次加入的封闭血清,一抗,二抗,以及显色剂能完全覆盖组织,而不沿着玻片流走。
  • 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织,室温封闭30min。
  • 加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒4°过夜孵育。
  • 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与超敏兔鼠通用二抗(HRP标记)覆盖组织,室温孵育50min。
  • DAB显色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加(稀释液和浓缩液1000:50配制)新鲜配制的DAB显色液,显微镜下控制显色时间,阳性为棕黄色,纯水冲洗切片终止显色。
  • 复染细胞核:苏木素染色2-3mins左右,自来水洗,苏木素分化液分化2秒,自来水冲洗,苏木素返蓝液返蓝15-30s,流水冲洗。
  • 脱水封片:将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -无水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脱水透明,将切片从二甲苯拿出来稍晾干,中性树胶封片。
  • 显微镜镜检,图像采集分析。
  • 结果判读:

苏木素染出细胞核为蓝色,DAB显出的阳性表达为棕黄色,红色显色试剂呈粉红色

  • 注意事项:

1. 注意切片脱蜡是否彻底;

2. 实验过程中切片勿干片;

3.  实验操作中小心枪头挂伤组织。

2. 实验过程中切片勿干片;

3.  实验操作中小心枪头挂伤组织。

暂无

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