简介:

  质粒转化:携带外源DNA片段的质粒进入感受体细胞后,在细胞中进行自我复制。多用于后期提取质粒。

  质粒提取:即去除 RNA,将质粒与细菌基因组DNA分开,去除蛋白质及其它杂质,以得到相对纯净的质粒。目前实验室涉及较多的为大量提取和小量提取。

  实验步骤:(以质粒样本提取大量质粒为例)

  1. 从-80℃冰箱中取出对应的感受态细胞,室温下置于冰盒上解冻,标记;

  2. 向感受态细胞中加入2µl的质粒,置于4℃冰箱中,冰浴30min;

  3. 在42℃水浴锅中热激90s,然后立即在冰盒上放置2min;

  4. 每管加1mL LB培养基,37℃摇床震荡,220rpm×30min;

  5. 取100µl 转化液加入对应抗性的平板中,倒入适量玻璃珠,涂匀液体;

  6. 将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养过夜。

  7. 挑选克隆子接种于1mL含对应抗性的LB液体培养基,37℃,220rpm振荡培养过夜。

  8. 按1/1000的比例,接种于200mL对应抗性的LB液体培养基,37℃,220rpm振荡培养过夜。

  9. 4℃下8000rpm离心收集菌体,用无内毒素质粒大提试剂盒提取质粒。

上一篇: 下一篇:

推荐

  • 扫描电镜观察

    1157

      客户自己将样品进行干燥喷金处理,贴于载物台的导电胶上上机检测。

    查看全文
  • 引物合成(miRNA)

    1281

      简介:引物,是指在核苷酸聚合作用起始时,刺激合成的一种具有特定核苷酸序列的大分子,与反应物以共价键形式连接。   mRNA和lncRNA的引物设计是...

    查看全文
  • 组化/荧光图片分析

    1367

      服务介绍:   分析软件:Image-pro plus 6.0 (Media Cybernetics, Inc., Rockville, MD, USA)   实验流程:   (1)样片接收:图片或扫描...

    查看全文

您好!请登录

点击取消回复
    展开更多
    点击展开我们的联系方式