质粒大提（甘油菌）

　　简介：

　　质粒转化：携带外源DNA片段的质粒进入感受体细胞后，在细胞中进行自我复制。多用于后期提取质粒。

　　质粒提取：即去除 RNA，将质粒与细菌基因组DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。目前实验室涉及较多的为大量提取和小量提取。

　　实验步骤：(以质粒样本提取大量质粒为例)

　　1. 从-80℃冰箱中取出对应的感受态细胞，室温下置于冰盒上解冻，标记;

　　2. 向感受态细胞中加入2µl的质粒，置于4℃冰箱中,冰浴30min;

　　3. 在42℃水浴锅中热激90s，然后立即在冰盒上放置2min;

　　4. 每管加1mL LB培养基，37℃摇床震荡,220rpm×30min;

　　5. 取100µl 转化液加入对应抗性的平板中，倒入适量玻璃珠，涂匀液体;

　　6. 将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养过夜。

　　7. 挑选克隆子接种于1mL含对应抗性的LB液体培养基，37℃，220rpm振荡培养过夜。

　　8. 按1/1000的比例，接种于200mL对应抗性的LB液体培养基，37℃，220rpm振荡培养过夜。

　　9. 4℃下8000rpm离心收集菌体，用无内毒素质粒大提试剂盒提取质粒。

　　实验周期：7个工作日

　　实验要求：甘油菌50ul;质粒样品，20ng/ul，20ul。干冰运输。

　　注明甘油菌和质粒的抗性。