Real-time PCR检测

未分类 4720

  简介:荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对产物进行分析,计算待测样品模板的初始浓度。可以用于检测mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA的基因表达水平。最终所得的PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进一步验证引物特异性。

  实验流程:

  1.接收样本

  2.组织匀浆、细胞和血液样本吹打裂解-RNA提取-RNA浓度测定—逆转录成cdna—荧光定量PCR-(PCR产物电泳)-数据分析

  其中mRNA为普通逆转录,lncRNA可选采取普通和特异性逆转录,circRNA和miRNA采取特异性逆转录

  3.交付结果:完整项目报告(扩增曲线、数据分析、引物信息、实验报告)

  实验周期:60个循环内,7个工作日内出结果

  样品要求:

  1、组织: 100mg(黄豆大小),最少50mg(绿豆大小),脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加。

  2、细胞:1×10^6个细胞,贴壁细胞舒展,未变圆;

  3、全血:2mL,最少1mL新鲜血液EDTA抗凝管;

  4、血清:2mL,干冰运输;

  5、植物:叶、果肉、种子等需100mg,最少50mg。

  6、RNA样品:纯度OD260/280 比值为1.8-2.0,浓度≥500ng/ul,体积≥20ul。

  7、cdna:cdna原液20uL。

  样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本

  1.动植物组织样本、细胞样本、血清、RNA、cDNA以干冰运输;

  2.细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、灌满培养液不漏出),常温运输;

  3.全血样本是EDTA抗凝管4度运输。

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