原位杂交(FISH双标)

  名称:荧光原位杂交(FISH双标)

   原位杂交(FISH双标)
  图1 MalaT1(红)+mir-3064-5p(绿)

  价格:300/张

  标本要求:石蜡,冰切,细胞爬片

  产品周期:5个工作日。

  项目介绍:

  1. 原位杂交原理:原位杂交是指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交,从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

  2. 所需器材:

  脱水机G-JT12s,包埋机G-L5/p5,病理切片机RM2016,冻台G-P1,烤箱GFL-70/230,组织摊片机G-KDP,载玻片及盖玻片,正置荧光显微镜,成像系统,恒温箱,高压灭菌锅,移液枪,钟摆摇床。

  3. 主要试剂:DEPC。原位杂交固定液。PBS缓冲液。20×SSC洗脱液。蛋白酶K。DAPI。抗荧光淬灭封片剂。杂交液。

  实验步骤:

  细胞爬片荧光探针原位杂交双标实验步骤

  1、细胞爬片固定:细胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min,于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

  2、消化:基因笔画圈,根据不同组织不同指标特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。纯水冲洗后PBS洗3次×5min。

  3、预杂交:滴加预杂交液37°恒温箱1h。

  4、杂交:倾去预杂交液,滴加含探针1杂交液,37度杂交过夜。

  5、杂交后洗涤:洗去杂交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC 37°洗10min。若非特异杂交体较多,可以增加甲酰胺洗涤

  6、杂交:倾去预杂交液,滴加含探针2杂交液,37度杂交过夜。

  7、DAPI复染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片。

  8、镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;FAM(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;CY3红光激发波长510-560,发射波长590nm,发红光。)

  细胞爬片荧光探针原位杂交双标实验结果判读

  DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色,阳性表达为相应荧光素标记的荧光。FAM(488)为绿光,cy3为红光。mRNA原位杂交显示结果理论为胞浆阳性,少数核阳性属正常。micRNA与lncRNA不同指标表达定位不同。根据表达量不同荧光亮度有强弱。

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