原位杂交检测

　　项目介绍

原位杂交技术(In situ hybridization，ISH)是利用核酸分子互补配对使杂交探针可以特异性结合于组织或细胞中目标核酸分子，再通过探针带有的地高辛或者荧光标记物，特异性鉴定、检测目标核酸分子的相对含量以及在组织细胞中的定位。因此原位杂交可以在组织或细胞原有结构基础之上(组织切片或细胞)，检测某种基因的有无，定位及半定量。荧光标记探针进行原位杂交即为FISH(Fluorescence in situ hybridization)，可以替代放射标记物，灵敏度高、实验效率高。

应用

原位杂交可以定性检测组织细胞中的mRNA、lncRNA、circRNA，也可以定位及分析染色质中的基因。利用特异性16s RNA探针还可以简单样品中的细菌、古细菌，还可以通过特意探针鉴定组织细胞中的病毒。FISH能够用来检测或确认基因或染色体是否异常，医学和品种鉴定、DNA特定功能研究。利用FISH方法还可检测非整倍体、基因重排、拷贝数变异等。

样本保存运输

组织冰冻切片

组织切取需要部位，厚度在2mm 左右, PBS 漂洗，干冰运输或立即置于固定液中。组织固定有原位杂交固定液(动物)、原位杂交固定液(植物)、原位杂交固定液(较嫩植物)，室温固定12 小时(根据组织大小)以上，植物组织固定时需常温抽真空30min，再用纯水或PBS 清洗两次后， 放入15% 蔗糖溶液中，4℃脱水8 小后，换30% 蔗糖溶液4℃过夜。冰切时佩戴手套。冰冻切片放-20℃或-80℃ 保存备用。

组织石蜡切片

组织切取需要部位，厚度在2mm 左右, PBS 漂洗后立即固定。动物组织用原位杂交固定液(动物)，植物组织用原位杂交固定液(植物)或原位杂交固定液(较嫩植物)，植物组织固定时需常温抽真空30min，固定12h 以上。固定完成后脱水、包埋、切片。梯度酒精配制需用DEPC 水。石蜡常规保存备用。

标本运输

冰冻切片：标本放原位杂交固定液中，常温运输;冰冻切片-20℃运输;新鲜组织干冰运输。交接单随样本一起，单独封装。

石蜡切片：标本放原位杂交固定液中，常温运输;石蜡切片常温运输。交接单随样本一起，单独封装。

细胞爬片：细胞爬片加原位杂交固定液后密封4℃运输。交接单随样本一起，单独封装。

DEPC 水配制

纯水中加入0.1%DEPC 原液震荡搅拌2h 后静置过夜后高压灭菌，有效灭菌时间30min 以上，或直接购买。

结果展示

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