杭州浩克生物
一、实验器材及试剂
1、实验器材
| 名称 | 厂家 | 型号 |
| 脱水机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JJ-12J |
| 包埋机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-P5 |
| 病理切片机 | 上海徕卡仪器有限公司 | RM2016 |
| 冻台 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-L5 |
| 组织摊片机 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-P |
| 烤箱 | 上海福玛实验仪器有限公司 | DGX-9003B |
| 载玻片及盖玻片 | 江苏世泰实验器材有限公司 | 10212432C |
| 水浴锅 | 天力医疗器械有限公司 | TL-420D |
| 脱色摇床 | 北京市六一仪器厂 | WD-9405A |
| 涡旋混合器 | 天悦电子 | TYXH-II |
| 移液枪 | Dragon | KE0003087/KA0056573 |
| 组化笔 | Gene tech | GT1001 |
| 倒置荧光显微镜 | 日本尼康 | Nikon Eclipse Ti-SR |
| 成像系统 | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要实验试剂
| 试剂 | 厂家 | 货号 |
| 无水乙醇、二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | |
| PBS缓冲液 | 谷歌生物 | G0002 |
| 蛋白酶K | Roche | |
| 破膜液 | 谷歌生物 | G1204 |
| DAPI | 谷歌生物 | G1012 |
| 抗荧光淬灭封片剂 | 谷歌生物 | G1401 |
| 盐酸、氨水、双氧水 | 国药集团化学试剂有限公司 | |
| Tunel试剂盒 | Roche | 11684817910 |
二、石蜡切片tunel实验步骤
1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。
2、修复：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走)，在圈内滴加蛋白酶K工作液覆盖组织，37度温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、破膜：切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织，常温下孵育20min，将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、加试剂1,2：按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂1(TdT)和试剂2(dUTP)按2:29混合，加到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃水浴锅孵育2小时，湿盒内加少量水保持湿度。
5、DAPI复染细胞核：切片用PBS(PH7.4)洗涤3次，每次5min。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10min。
6、封片：玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
7、 镜检拍照：切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。
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