Tunel(荧光)检测

  一、实验器材及试剂

1、实验器材

名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 上海福玛实验仪器有限公司 DGX-9003B
载玻片及盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司 10212432C
水浴锅 天力医疗器械有限公司 TL-420D
脱色摇床 北京市六一仪器厂 WD-9405A
涡旋混合器 天悦电子 TYXH-II
移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573
组化笔 Gene tech GT1001
倒置荧光显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse Ti-SR
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

2、主要实验试剂

试剂 厂家 货号
无水乙醇、二甲苯 国药集团化学试剂有限公司
PBS缓冲液 谷歌生物 G0002
蛋白酶K Roche
破膜液 谷歌生物 G1204
DAPI 谷歌生物 G1012
抗荧光淬灭封片剂 谷歌生物 G1401
盐酸、氨水、双氧水 国药集团化学试剂有限公司
Tunel试剂盒 Roche 11684817910

 

二、石蜡切片tunel实验步骤

1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

2、修复:切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈(防止液体流走),在圈内滴加蛋白酶K工作液覆盖组织,37度温箱孵育30min。将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

3、破膜:切片稍甩干后在圈内滴加破膜工作液覆盖组织,常温下孵育20min,将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

4、加试剂1,2:按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂1(TdT)和试剂2(dUTP)按2:29混合,加到圈内覆盖组织,切片平放于湿盒内,37℃水浴锅孵育2小时,湿盒内加少量水保持湿度。

5、DAPI复染细胞核:切片用PBS(PH7.4)洗涤3次,每次5min。去除PBS后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。

6、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

7、 镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。

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