免疫荧光单标+DAPI(双色)

免疫荧光/IF 5540

  一、实验器材及试剂

  1、实验器材

名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 上海福玛实验仪器有限公司 DGX-9003B
载玻片及盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司 10212432C
微波炉 格兰仕微波炉电器有限公司 P70D20TL-P4
脱色摇床 北京市六一仪器厂 WD-9405A
涡旋混合器 天悦电子 TYXH-II
移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573
组化笔 Gene tech GT1001
倒置荧光显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse Ti-SR
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

  2、主要实验试剂

名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 上海福玛实验仪器有限公司 DGX-9003B
载玻片及盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司 10212432C
微波炉 格兰仕微波炉电器有限公司 P70D20TL-P4
脱色摇床 北京市六一仪器厂 WD-9405A
涡旋混合器 天悦电子 TYXH-II
移液枪 Dragon KE0003087/KA0056573
组化笔 Gene tech GT1001
倒置荧光显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse Ti-SR
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

 

  二、石蜡切片免疫荧光实验步骤

  1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗。

  2、抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH9.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火至沸后断电间隔10min中低火至沸,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定)

  3、加一抗:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)

  4、加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min。

  5、DAPI复染细胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液,避光室温孵育10min。

  6、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。

  7、镜检拍照:切片于尼康倒置荧光显微镜下观察并采集图像。

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