细胞爬片&滴片

　　一、细胞爬片

　　1、爬片前期处理：

　　①爬片固定：在孔中滴加3ml固定液，固定15min。吸净孔中固定液，纯水水洗3次(每次水洗的时候用尖头镊子挑起爬片清洗，然后用吸管吸净纯水，β半乳糖染色使用专用的固定液。)

　　②爬片破膜：在孔中滴加3ml破膜液，破膜15min。吸净孔中破膜液，纯水水洗3次(每次水洗的时候用尖头镊子挑起爬片清洗，纯水不吸出，留着后续使用)

　　(针对六孔板，其它孔板滴加适量的固定液和破膜液。)

　　2、爬片染色：

　　后续染色步骤同石蜡切片相同，染色时间适当延长，清洗或者更换染液使用巴氏吸管吸净之前的染液。

　　3、爬片封片：

　　加入适量酒精或水(看染色过程中最后一步是使用水还是酒精)后挑起爬片，爬片靠在孔边缘，吸净酒精后放置于65℃烤箱烘干15min。(染色过程中注意细胞爬片的方向，保证细胞面朝上和染液充分接触)

　　从烤箱中取出装有爬片孔板，在载玻片上写下每个孔板的编号，在载玻片上滴加一滴中性树胶后，用镊子夹起对应编号的爬片，细胞面朝下封片。(封片过程中注意细胞爬片的方向，保证细胞面朝下封片)

　　二、其他细胞种类的涂片制备：

　　1.取细胞悬液，2800r 4℃离心5min，弃上清液，根据底部沉淀的细胞量加入2ml甲醇固定。若肉眼看不见细胞沉淀时，用3000r/min，4℃离心10min

　　2.取用甲醇重悬的细胞悬液，2800r 25℃离心5min，弃上清液，根据底部沉淀加入PBS：

　　①若肉眼看不见细胞沉淀时，用3000r/min，25℃离心10min，依然无沉淀时，留取底部约0.2ml的液体，再加入0.5ml的PBS混匀后用移液枪吸取200ul，滴于提前用组化笔画好的小圆圈中(3cmX2cm的椭圆);

　　②若细胞沉淀量很少，绿豆大小时，弃上清，留取底部沉淀，加入0.5mlPBS,用移液枪吹打混匀后，吸取200ul，涂于提前用组化笔画好的小圆圈中(3cmX2cm的椭圆);

　　③若细胞沉淀量很多，黄豆大小或更大时，弃上清，留取底部沉淀，加入2mlPBS,用移液枪吹打混匀后，吸取150ul，涂于提前用组化笔画好的大圆圈中(最大长边约5cm，最大短边约2cm的椭圆)，在显微镜下观察细胞量的多少，若还是过厚，再用PBS对倍稀释该细胞悬液，直至在显微镜下观察到细胞量涂布均匀。

　　3.用枪将细胞悬液铺满整个圆圈，涂片放置自然晾干。