改良苯酚品红染色

  一、实验器材及试剂

  1、实验器材
 

名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 GFL-230
载玻片 haokebio  
正置光学显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse E100
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

  2、主要实验试剂
 

试剂名称 厂家 货号
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司 100092683
盐酸 国药集团化学试剂有限公司  
冰醋酸 国药集团化学试剂有限公司  
改良苯酚品红染液 haokebio  
甘油明胶封片剂 haokebio G1402

 

  二、实验步骤

  1、取材:查阅相关植物对应的根尖分裂旺盛期,在此期间剪取新生根尖约2-3cm,纯水稍洗净。

  2、预处理:用秋水仙素或者8-羟基喹啉预处理或者置于纯水中4℃处理约24h(选做)。

  3、固定:取出根尖置于卡诺氏固定液(无水乙醇:冰醋酸=3:1混匀)中4℃固定约1-4h,转移根尖至75%的乙醇中保存;

  4、低渗:取出根尖纯水稍洗2遍,置于纯水中浸泡约30min;

  5、解离:取出根尖置于1M HCL溶液中60℃处理10-30min,纯水洗2遍,置于纯水中浸泡约30min;

  6、取材染色:将根尖用纯水清洗2遍后置于载玻片上,切取根尖分生区并拨散,组画笔画圈,晾干或者稍烤干分生区组织细胞,滴加改良苯酚品红染液染色15-35min;

  7、压片:直接用染色液封片,稍吸除多余的染色液,盖玻片上覆盖滤纸,用橡皮擦或者手指平整地按压玻片进行压片,分散染色体;

  8、封片:将制好的玻片放置-20℃下冰冻约10min,取出后用刀片从盖玻片一角迅速撬开,晾干或烤干载玻片和盖玻片,甘油明胶或中性树胶封片。

  9、显微镜镜检,图像采集分析。

 

  三、结果判读:

  染色体呈深的紫红色,背景浅的紫红色或者无色。

 

  四、注意事项:

  1、若固定后的根尖暂时不使用,保存在75%的乙醇中,下次使用前需要再次固定,4℃条件下约4h。

  2、压片过程中,防止盖玻片移动或者破裂,得到数量清晰的染色体,此步骤操作较难成功。

  3、改良苯酚品红染色液阴凉通风处可保存1年不变质。

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