一、实验器材及试剂

　　1、实验器材

　　2、主要实验试剂

　　二、实验步骤

　　1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。

　　2、铁苏木素染色：铁苏木素A液与B液等比混合成铁苏木素染液，切片入铁苏木素20min，

　　自来水洗，盐酸酒精溶液分化小于5s，自来水冲洗，蒸馏水洗。

　　4、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红浸染5-10 min，0.1-1%冰醋酸快速漂洗。

　　5、橙黄G染色：橙黄G溶液浸染1-5min，显微镜下控制，以胶原处丽春红褪色为准。

　　6、丽春红酸性品红染色：切片入丽春红酸性品红染液染3-5min，0.1-1%冰醋酸快速漂洗。

　　7、亮绿染色：切片入亮绿染液3-10min，0.1%-1%的冰醋酸三缸分化，无水乙醇两缸脱水。

　　8、透明封片：切片放入第三缸无水乙醇5min，二甲苯透明5min，中性树胶封片。

　　9、显微镜镜检，图像采集分析。

　　三、结果判读：

　　细胞核蓝紫色，矿化骨绿色，非矿化骨是橙红色。

　　四、注意事项：

　　1、根据切片的数量对铁苏木素染液定期进行更换，也可以现配现用;

　　2、橙黄G与丽春红的染色程度要控制好，胶原部分不能是太红，会影响亮绿的着色;

　　3、冰醋酸分化亮绿的过程中，要分化适当，不能过深或者过浅。