Goldner三色法染色

  一、实验器材及试剂

  1、实验器材

名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 GFL-230
载玻片 haokebio  
正置光学显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse E100
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

  2、主要实验试剂

试剂名称 厂家 货号
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司 100092683
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司 10023418
Goldner染液套装 haokebio  
冰醋酸 国药集团化学试剂有限公司 10000218
中性树胶 国药集团化学试剂有限公司 10004160

 

  二、实验步骤

  1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗。

  2、铁苏木素染色:铁苏木素A液与B液等比混合成铁苏木素染液,切片入铁苏木素20min,

  自来水洗,盐酸酒精溶液分化小于5s,自来水冲洗,蒸馏水洗。

  4、丽春红酸性品红染色:切片入丽春红酸性品红浸染5-10 min,0.1-1%冰醋酸快速漂洗。

  5、橙黄G染色:橙黄G溶液浸染1-5min,显微镜下控制,以胶原处丽春红褪色为准。

  6、丽春红酸性品红染色:切片入丽春红酸性品红染液染3-5min,0.1-1%冰醋酸快速漂洗。

  7、亮绿染色:切片入亮绿染液3-10min,0.1%-1%的冰醋酸三缸分化,无水乙醇两缸脱水。

  8、透明封片:切片放入第三缸无水乙醇5min,二甲苯透明5min,中性树胶封片。

  9、显微镜镜检,图像采集分析。

 

  三、结果判读:

  细胞核蓝紫色,矿化骨绿色,非矿化骨是橙红色。

 

  四、注意事项:

  1、根据切片的数量对铁苏木素染液定期进行更换,也可以现配现用;

  2、橙黄G与丽春红的染色程度要控制好,胶原部分不能是太红,会影响亮绿的着色;

  3、冰醋酸分化亮绿的过程中,要分化适当,不能过深或者过浅。

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