网状纤维染色

　　一、实验器材及试剂

　　1、实验器材

　　2、主要实验试剂

　　二、实验步骤

　　1、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min，自来水洗。

　　2、酸性GMSJ染色：将GMSJ与硫酸1：1混合成酸性GMSJ，滴加该混合液处理5min，蒸馏水洗。

　　3、草酸染色：滴加草酸漂白1-2min或者组织变成无色即可，蒸馏水洗3次。

　　4、硫酸铁铵染色：滴加硫酸铁铵染色5-15min(避光)，蒸馏水洗3次。

　　5、银染：取XSY2ml，逐滴加入浓氨水，边加边摇匀，出现沉淀后继续滴加浓氨水，至沉淀刚好溶解，加入NaOH 2ml，再次形成沉淀，逐滴加入浓氨水，至沉淀刚好溶解，加入蒸馏水定容至40ml，即为银氨液。滴加银氨液处理1-5min(避光)，蒸馏水洗3次。

　　6、还原染色：切片入10%的中性甲醛液还原1-3min(避光)，蒸馏水洗3次。

　　7、脱水封片：切片依次入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明，中性树胶封片。

　　8、显微镜镜检，图像采集分析。

　　三、结果判读：

　　网状纤维呈黑色或者黑褐色，背景呈棕黄色。

　　四、注意事项：

　　1、银氨液在避光4℃条件下可保存1-2月，使用前复温，可根据配制后存储时间的长短，在第4、5步适当延长染色时间，促使银离子的结合。

　　2、NaOH、硫酸和草酸可以不避光常温保存，其余染色全部避光常温保存。

　　3、染色过程中，需要使用避光的染色盒进行染色。

　　4、在配制银氨液过程中，沉淀恰好溶解要严格控制。