流式-JC-1

价格￥80
单位样
货号HKF6018
品牌浩克

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服务介绍：

货号	名称	规格	价格
HKF6018	流式-JC-1	样	80

　　一、实验简介
　　线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1是一种理想的用于检测线粒体膜电位的荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。其原理是，当线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体基质中，形成聚合物，488nm激发时的最大发射波长为590nm，可以产生红色荧光，在流式上表现为FL1和FL2双阳性;当线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体，488nm激发时最大发射波长为527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图汇总所有细胞FL1为阳性。凋亡细胞则大多为FL1单阳性。不同荧光颜色的转变反应线粒体膜电位的变化，常用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。

　　二、流式JC-1实验步骤
　　1、收集细胞：细胞悬液转入离心管中，1000rpm离心5min收集细胞,弃上清。
　　2、PBS洗涤细胞：加入3ml 4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1000rpm离心5min，弃上清。沉淀震荡混匀。
　　3、细胞计数：移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数,调整细胞为0.5-1×10^6/ml。
　　4、装载探针：按照1:500用无血清培养基稀释JC-1，使终浓度为10ug/mL。
　　5、孵育探针：37°C细胞培养箱内孵育20分钟，每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触，用无血清的培养液洗涤细胞三次，以去除未进入细胞内的探针。
　　6、上机检测：流式细胞仪使用激发波长Ex=488nm，发射波长FL1(Em=525±20nm);FL2(Em=585±20 nm)，用Flow Jo软件分析结果。

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