【储存与运输】

本试剂常温保存运输，有效期一年。

【实验前准备】

自备苏木素分化液、苏木素返蓝液、二甲苯、梯度乙醇、无水乙醇、中性树胶等。

【使用方法】

一、样本前处理

1、对于石蜡切片：切片依次经二甲苯脱蜡 12 min，更换新鲜的二甲苯脱蜡 12 min，无水乙 醇 5min，新鲜无水乙醇 5 min，95%乙醇 5 min，85%乙醇 5 min， 自来水洗。

2、对于冰冻切片：-20℃保存的冰冻切片需静置恢复至室温,经所需固定液固定后水洗。

二、HE 染色

1、苏木素染色：上述处理好的切片，进入苏木素染液染色 5min， 自来水洗；

2、分化：切片经苏木素分化液 1-3s， 自来水流水充分冲洗；

3、返蓝：苏木素返蓝液返蓝 10-15s， 自来水流水充分冲洗；

4、伊红染色：切片经 85%乙醇脱水 2min，然后进入伊红染液(醇溶)中染色 10-15s，经 95% 乙醇分色 5-10s,经两次无水乙醇脱水各 3min；

5、透明：切片入二甲苯透明 3min，更换新鲜的二甲苯再透明 3min。

6、封片：滴加中性树胶进行封片。

【注意事项】

1.染色后用特定溶液将组织中过多结合的染液脱去，这个过程称为分化作用，组织在经苏 木素染色后，必须经过分化去除组织中过多结合及非特异性吸附的染料，才能进行伊红染 色，确保细胞核与胞浆显色分明。分化过程中，根据组织切片厚度、组织类型等结合镜下 观察适当调整分化时间。

2.HE 染色中苏木素染色后的返蓝很重要。苏木素在酸性条件下为离子状态，呈红色；在碱 性条件下呈蓝色。组织切片经酸性分化液分化后呈红色或粉红色，需立即水洗终止分化， 再用弱碱性溶液使苏木素，这个过程就是返蓝作用。如果没有专用的返蓝液，用温水浸洗 也能使细胞核返蓝，只是所需时间略长。                                            

3.苏木素及伊红染色程度可以根据染色需要进行调整染色时间。                       

4.苏木素染液可重复使用多次，当组织或细胞着色明显偏浅或颜色异常时请更换新的染 液。

5.用于染色后脱水的无水乙醇纯度需大于 99.9%。如果乙醇含水，伊红会褪色导致染色不 均匀。

6.伊红染液(醇溶)可反复使用数次，当组织着色明显偏浅时建议更换新的染液。

7.操作时请穿实验服，佩戴一次性手套。