Edu染色试剂盒(红,AF555)

产品 固定液 染液 组化 6250
Edu染色试剂盒(红,AF555)

Edu染色试剂盒(红,AF555)

组织病理学中,组织必须先经过及时有效的固定才能完成随后的包埋及切片。
  • 价格¥700
  • 规格100T
  • 货号HKI0022
  • 单位
  • 品牌HaoKebio

产品介绍
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品牌商品编码商品名称规格价格
HaoKebioHKI0022Edu染色试剂盒(红,AF555)100T¥700


【产品简介】
EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine),中文名为 5-乙炔基-2′ -脱氧尿苷,是一种胸腺嘧啶 核苷类似物,在细胞增殖时能够替代胸苷(胸腺嘧啶脱氧核苷,thymidine) 插入正在复制的 DNA 分子中,  EdU 上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如Azide Alexa Fluor 488 等) 通过一价铜离子催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应 (Click reaction),从而可以进行高效快速的检测细胞增殖,特别是可以有效地检测处于 S 期 的细胞百分数。
本试剂盒中荧光探针为红色荧光,最大激发波长为 557nm,最大发射波长为 570 nm,处于 增殖的细胞被标记后,细胞核会显示出明亮的红色荧光,通过配套常规细胞核染料共同标记细 胞核,可用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等仪器直接观察细胞增殖情况;也可以使用流式细 胞仪检测体外培养细胞群荧光强度,根据荧光强度,来判断细胞周期中 S 期的 DNA 复制活性。

【储存与运输】
冰袋运输,-20˚C 储存,可稳定储存一年

【使用方法】

动物 EdU 注射

对于小鼠,可以按照 10-200mg/kg 的用量,把 EdU 用 PBS 配制成一定浓度,腹腔注射、特定组 织或器官局部注射或者加入饮用水中。具体用量跟所用动物的种类、体重和使用方式有关,可 以参考相关文献,因此初次使用时建议对 EdU 的使用浓度进行一定的摸索,或者直接使 50mg/kg 的浓度进行测试。

注射方式:依据客户实验而定,如腹腔注射,皮下注射,肌肉注射,尾静脉注射等,其中以腹腔 注射为多。6 小时后或根据特定实验确定适当的时间后,快速处死小鼠,取出所需组织,按照 常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。EdU 标记的时候也可参考相关文献自行调整。建议任何实 验均可取小肠组织检测细胞增殖情况,小肠上皮组织细胞增殖快,成年小鼠 EdU 注射 6 小时后 即可检测到阳性信息,可用作阳性对照进行预实验。

切片处理

切片前处理:组织器官最好进行清洗,以去除血液、组织中残留的EdU,降低背景。

切片厚度:3-10μm 为宜,切片过厚可能会影响切片背景。

切片后处理:

石蜡切片脱蜡:二甲苯脱蜡 2 次,15 分钟/次,乙醇梯度 (100%,95%,85%,75%) 洗脱各一次, 5 分钟/次,去离子水洗脱 1 次。

冰冻切片处理:室温放置 30 分钟后,固定 10 分钟,PBS 清洗 3 次,每次 5 分钟。

Edu 反应

按照 PB:CU:红色色原:AC=860:40:1:100 的比列配制 EdU 反应液。  (反应液现配现用)

每片组织滴加 50-100 μl 的 EdU 染色反应液,室温避光孵育 15 分钟,弃染色反应液,PBS 冲洗 3 次,每次 5 分钟。

其他染色

客户可以根据需要进行细胞表面或者细胞内抗原染色。

DAPI 染色

每片组织加入 50-100ul DAPI 染色液,染色 15 分钟,PBS 洗脱三次,每次 5 分钟。

图像拍照

染色完成后建议立刻观察,使用荧光显微镜或共聚焦显微镜采集图像,本试剂盒荧光染料 AF555 对应的光谱特性为 Ex/Em:557 nm/570 nm  (红色) ;DAPI 染色液对应的光谱特性为 Ex/Em:

358 nm/461 nm (蓝色) 。

【注意事项】

1. 对于体外培养细胞,具体 EdU 使用浓度、孵育时间随样品以及研究目的的不同,可进行 适当调整。

2. 部分组织细胞增殖速度缓慢,为了排除造模效果不佳等因素,建议选增殖快的组织样品作 为参照样本 (如肠道组织)。

3. 如果背景颜色过深,可能是实验中洗涤不充分、组织样品固定时间过长、固定液残余导致。

4. 催化剂 AC 颜色发生轻微变化,点击反应催化体系依旧能够正常进行,如呈现棕色,表明 该组分已失效,请弃用。

5. 操作时请穿实验服,佩戴一次性手套。

4. 催化剂 AC 颜色发生轻微变化,点击反应催化体系依旧能够正常进行,如呈现棕色,表明 该组分已失效,请弃用。

5. 操作时请穿实验服,佩戴一次性手套。

暂无

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