荧光三标信号放大试剂盒(冰冻切片、细胞爬片适用)

荧光三标信号放大试剂盒(冰冻切片、细胞爬片适用)

荧光三标信号放大试剂盒 (冰冻切片、细胞爬片适用)

荧光实验单标以及双标,预实验按正式实验正常收费,增加荧光放大(TSA)费用
  • 价格¥5280
  • 货号HKI0000-3A
  • 规格100T
  • 单位
  • 品牌HaoKebio

产品介绍
产品参数
资料下载

荧光三标信号放大试剂盒

(冰冻切片、细胞爬片适用)

货号:HKI0000-3A

【产品信息】

产品名称产品货号50T100T有效期
Flare520HKI0014     2.5ml     5ml     12 个月
Flare570HKI0015
Flare690HKI0017
HRP超敏山羊抗兔鼠通用二抗HKI0029
抗体洗脱液HKI0045
DAPI染色液(即用型)HKI0005
抗荧光淬灭封片剂HKI0007
TSA荧光信号增强剂HKI004625ul50ul

【产品简介】

酪酰胺信号放大(TSA)系统可用于检测荧光免疫细胞化学(ICC)、免疫组织化学(IHC)   中的低丰度靶点,可将信号灵敏度提高100倍。TSA 荧光试剂盒使用辣根过氧化物酶(HRP)直接催化固定化酶周围的荧光基团共价沉积,形成永久性共价键结合。在运用HRP二抗及一抗在室温下由抗体洗脱液脱离掉抗原失活的原理,重复此过程,即可实现同种属荧光双标及荧光三标以及多标(注:此过程仅适用于冰冻切片、细胞爬片的荧光多标)。

此试剂盒中的荧光探针可单独或配合使用。可以实现单标、双标、三标或荧光放大等功能不受一抗种属的影响,极大丰富了荧光多色的内容。

【储存与运输】

冰袋(wet ice)运输;-20℃长期保存,短期于4℃保存,有效期 12 个月。

使用方法

细胞爬片

1.固定通透

在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min,用4%多聚甲醛固定15min,PBS浸洗3此,每次3min。细胞通透剂(货号:HKI0048)室温通透20min(细胞膜上表达的抗原可省略)。

2.封闭处理

PBS浸洗3次,每次3min,吸水纸吸干PBS,滴入封闭液(货号:HKW2085/86/87/99)完全覆盖细

胞,室温封闭30min。

3.一抗孵育

弃掉封闭液,滴加用通用抗体稀释液(货号:HKW2083)适当比例稀释的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜(或37℃湿盒孵育2h)。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次,每次3敏,吸干多余液体滴加稀释好的与一抗相应种属的HRP标记二抗,湿盒中37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。

5.加TSA 信号放大试剂

根据需要标记的荧光颜色加对应的TSA 信号放大试剂,孵育3-10min可具体根据预实验条件。如遇标记效果差的可添加荧光增强剂进一步加强,增强剂:荧光试剂1:500正常孵育,浓度也可摸索使用。

6. 荧光多色实现

抗体洗脱液37℃预热至完全溶解,滴加足量抗体洗脱液完全覆盖细胞,37℃放置8分钟,弃去洗脱液,再次滴加足量抗体洗脱液完全覆盖细胞,37℃放置8分钟,弃洗脱液,PBS浸洗3次,每次5min,洗脱掉一抗及相应二抗,再重复步骤3-5,实现荧光多色。

7.DAPI复染细胞核

8.抗荧光淬灭封片剂封片

9.相应荧光通道拍照或扫描

冰冻切片

  1. 复温固定

冰冻切片室温防置30min后,入纯甲醇固定10min。(亦可采用其他固定方式)

2.阻断内源性过氧化物酶和血清封闭

PBS浸洗切片3次,每次5min,用过氧化物酶阻断剂(货号:HKI0047)孵育25min,阻断内源性过氧化物酶,滴入封闭液(货号:HKW2085/86/87/99)37℃孵育20min。

3.一抗孵育

弃掉封闭液,滴加适当比例稀释的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次,每次3敏,吸干多余液体滴加稀释好的与一抗相应种属的HRP标记二抗,湿盒中37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。

5.加TSA 信号放大试剂

根据需要标记的荧光颜色加对应的TSA 放大试剂,孵育3-10min可具体根据预实验条件。如遇标记效果差的可添加荧光增强剂进一步加强,增强剂:荧光试剂1:500正常孵育,浓度也可摸索使用。

   6.荧光多色实现

抗体洗脱液37℃预热至完全溶解,滴加足量抗体洗脱液完全覆盖组织,37℃放置8分钟,弃去洗脱液,再次滴加足量抗体洗脱液完全覆盖细胞,37℃放置8分钟,弃洗脱液,PBS浸洗3次,每次5min,洗脱掉一抗及相应二抗,再重复步骤3-5,实现荧光多色。

7.DAPI复染细胞核

8.抗荧光淬灭封片剂封片

9.相应荧光通道拍照或扫描

【注意事项】

  1. 本产品仅作科研用途。
  2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
  3. HRP超敏山羊抗兔鼠通用二抗属于附赠试剂,不足100T剂量,可根据需要回购。

暂无

说明文档下载

上一篇: 下一篇:

相关推荐

您好!请登录

点击取消回复
    展开更多
    点击展开我们的联系方式