【产品简介】
酪酰胺信号放大 (TSA) 系统可用于检测荧光免疫细胞化学 (ICC) 、免疫组织化学 (IHC) 中的低丰度靶点,可将信号灵敏度提高100倍。TSA 荧光试剂盒使用辣根过氧化物酶 (HRP) 直 接催化固定化酶周围的荧光基团共价沉积,形成永久性共价键结合。在运用HRP二抗及一抗在室 温下由抗体洗脱液脱离掉抗原失活的原理,重复此过程,即可实现同种属荧光双标及荧光三标 以及多标 (注:此过程仅适用于冰冻切片、细胞爬片的荧光多标) 。
此试剂盒中的荧光探针可单独或配合使用。可以实现单标或荧光放大等功能不受一抗种 属的影响,极大丰富了荧光多色的内容。
【储存与运输】
冰袋 (wet ice) 运输;-20℃长期保存,短期于4℃保存,有效期 12 个月。
【使用方法】
细胞爬片
1.固定通透
在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min,用4%多聚甲醛固定15min,PBS浸洗3 此,每次3min。细胞通透剂 (货号:HKI0048) 室温通透20min (细胞膜上表达的抗原可省略) 。
2.封闭处理
PBS浸洗3次,每次3min,吸水纸吸干PBS,滴入封闭液 (货号:HKW2085/86/87/99) 完全覆盖细 胞,室温封闭30min。
3.一抗孵育
弃掉封闭液,滴加用通用抗体稀释液 (货号:HKW2083) 按一定比例稀释的一抗并放入湿盒,4℃孵育
过夜 (或37℃湿盒孵育2h) 。
4.二抗孵育
PBST浸洗3次,每次3min,吸干多余液体滴加稀释好的与一抗相应种属的HRP标记二抗,湿盒中 37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。
5.加TSA 信号放大试剂
根据需要标记的荧光颜色加对应的TSA 信号放大试剂,孵育3-10min可具体根据预实验条件。 如遇标记效果差的可添加荧光增强剂进一步加强,增强剂:荧光试剂1:500正常孵育,浓度也可摸索使用。
6 . DAPI复染细胞核
7 . 抗荧光淬灭封片剂封片
8 . 相应荧光通道拍照或扫描
冰冻切片
1. 复温固定
冰冻切片室温防置30min后,入纯甲醇固定10min。 (亦可采用其他固定方式)
2.阻断内源性过氧化物酶和血清封闭
PBS浸洗切片3次,每次5min,用过氧化物酶阻断剂 (货号:HKI0047) 孵育25min,阻断内源性过氧化 物酶,滴入封闭液 (货号:HKW2085/86/87/99) 37℃孵育20min。
3.一抗孵育
弃掉封闭液,滴加适当比例稀释的一抗并放入湿盒,4℃孵育过夜。
4.二抗孵育
PBST浸洗3次,每次3敏,吸干多余液体滴加稀释好的与一抗相应种属的HRP标记二抗,湿盒中37℃ 孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。
5.加TSA 信号放大试剂
根据需要标记的荧光颜色加对应的TSA 放大试剂,孵育3-10min可具体根据预实验条件。如遇 标记效果差的可添加荧光增强剂进一步加强,增强剂:荧光试剂1:500正常孵育,浓度也可摸 索使用。
6 . DAPI复染细胞核
7 . 抗荧光淬灭封片剂封片
8 . 相应荧光通道拍照或扫描
【注意事项】
1.本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
3.POLY-HRP羊抗兔二抗属于附赠试剂,不足100T剂量,可根据需要回购。
4.样本来源为兔 (或小鼠) ,若出现较高非特异性荧光着色,一抗为兔抗 (或鼠抗) 时,可 采用HRP标记的山羊抗兔IgG(货号:HKS23303) 或HRP标记的山羊抗小鼠IgG (HKS23301) 。
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