阿利新蓝-茜素红染色试剂盒

【产品信息】

产品名称	产品货号	规格	有效期
阿利新蓝-茜素红染色试剂盒	HX20037	100mL*2	一年

【产品简介】

   阿利新蓝-茜素红染色，是对骨和软骨进行染色以观察脊椎动物骨骼在生理和病理状态下的改变的方法，阿利新蓝是一种含铜离子的苯二甲蓝染料，一种阳离子染料,与硫酸根和糖蛋白结合强烈，可将黏多糖染成蓝色，在骨染色中把软骨染成蓝色。茜素红是阴离子染料能与钙结合形成红色沉淀，在骨骼染色中可将钙化的骨基质染成红色。

【产品组成】

产品目录	主要成分	产品规格
阿利新蓝染液	阿利新蓝	100mL
茜素红染液	茜素红	100mL

【储存与运输】

本试剂常温保存运输，有效期一年。

【实验前准备】

自备无水乙醇、纯水、3%双氧水、丙酮、KOH溶液、苯甲酸钠、麝香草酚。

自备眼科剪、镊子等相关工具。

【使用方法】

1.取材

剥皮→去脂→开腹→勾肠→剜五脏→割喉→扣眼

详解：

可将标本浸入70摄氏度热水中水浴加热10-30秒后取出，剥皮去内脏，或浸过热水后在百分之75乙醇固定4-6小时，也有利于剥离。水温不宜过高，将影响骨骼完整性。

剥掉外皮，从腹中线割一小口，用钝头镊子掏出胸、腹腔里的所有脏器，彻底冲洗体腔。

在去皮时，可用眼科小弯镊直接撕脱皮肤，在剥离背部皮肤时，应仔细去除肩胛骨之间的脂肪组织，否则会影响到此处椎骨的染色效果，同时要防止因过度剥离而致上肢骨与躯干分离在剥除髋部肌肉时则不宜剔得太干净，否则躯干骨会与后肢骨骼分离开，从而影响标本整体美观和不利于观察后肢骨的发育情况。但当撕脱皮肤至踝关节和腕关节处时，很容易连同趾(指)一起撕脱，从而影响标本的完整性，因此，在撕至踝关节和腕关节时可先保留趾(指)部的皮肤，以免撕脱趾(指)骨。在剥离颈前和胸骨前面的皮肤和脂肪时，注意不要损伤到锁骨和下颌骨，并尽将颈前和胸骨前脂肪组织气管食管剔出干净。

（样本表面有血污或其他无法冲洗的杂质，可用3%双氧水或3%重铬酸钾溶液浸泡，并反复浸洗。）

2.固定

将处理后的骨骼整理好姿势后，浸泡于95%酒精固定液中固定1天，然后再次浸泡于新的95%酒精固定液中固定2-3天，直至标本脱水硬化。

3.脱脂

将固定后的标本浸泡于丙酮溶液内脱脂2-3天，取出后用水持续冲洗8-16小时，直至标本可以沉入水底为止。

4.软骨染色

将标本浸泡于软骨染液中3-18小时，取出后使用70%酒精溶液反复进行清洗，直至冲洗液颜色无色。（蓝染结束以尾骨着蓝色，表皮组织淡蓝色为标准）

5.预透明

将标本置于1%KOH溶液中0.5-1小时，再浸泡于0.5%KOH 溶液中1-2小时（骨骼清晰即可）。

6.硬骨染色

然后将标本浸泡于硬骨染色液中2-4h，然后取出，即得到染色后的骨骼标本。

7.脱色

将染色后的标本浸泡于1%KOH溶液中1-2小时，再浸泡于0.5%KOH溶液中1-2小时，直至肌肉颜色变浅，骨组织变为红色。

8.透明

将脱色后的标本依次浸泡于0.5%的KOH溶液与甘油所形成的梯度溶液,配比比例分别为：

1：4、2：3、3：2、4：1，标本在梯度溶液中浸泡的时间为1-2天。，每次均以标本沉入梯度溶液底部为准，最终将标本置于纯甘油中进行密封保存。

（上述KOH溶液建议用纯水溶解KOH后加入乙醇配制成含70%乙醇的KOH溶液）

【注意事项】

1. 可根据染色程度需要调整染色时间，染色时间越长，组织颜色越深。

2. 阿利新蓝染色勿过深，避免组织背景偏蓝。

3. 阿利新蓝与茜素红染色的顺序不能更改。

4. 透明阶段标本较软，需要用工具轻柔处理。

5. 密封保存可采用纯甘油加入少量麝香草酚。