Haoke®通用型转染试剂

【产品简介】

Haoke^® Universal Transfection Reagent是一种多用途的脂质体转染试剂，用于向几乎所有常见细胞系和多种难以转染的细胞系中进行DNA、siRNA和mRNA的转染。并支持快速转染程序，可以缩短您的转染时间，适配高通量、自动化筛选。

【储存方式】

2-8ºC保存，不可冷冻。

【使用方法】

操作前注意事项

1. 为降低细胞毒性，细胞铺板时需要更换不含抗生素的培养基。对于质粒DNA转染，细胞密度需达到70-90%，有些细胞在密度偏低时容易出现细胞毒性；
2. 制备核酸稀释液和转染试剂稀释液时应使用减血清的Opti-MEM™培养基或不含血清和抗生素的培养液，因为血清会影响核酸与转染试剂复合物的形成；
3. 一般情况下，转染后无需更换培养基。然而，有些细胞对转染试剂比较敏感，如果在转染后状态不佳，可在 4-6小时后对细胞进行换液，转染效率无明显影响；
4. 首次使用该试剂或者更换细胞类型，特别是对转染试剂敏感的细胞，需要进行预实验，使用不同剂量的转染试剂进行实验，以便摸索出最适转染试剂用量。DNA的转染量可以在DNA：Universal Transfection Reagent (µg/µL）=1:1-1:5 之间摸索。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套；
6. 本产品仅用于科研。

操作步骤

一、DNA 转染

（以24孔板转染DNA为例的操作步骤）

Day 1：

在500 μL不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到70-90%。

Day 2：

1. DNA 稀释液制备:  取1个干净的 1.5 mL 离心管， 向25 µL Opti-MEM™培养基中加入 0.5 µg DNA 后轻柔混匀，得到 DNA 稀释液；
2. 转染试剂稀释液制备:另取1个干净的1.5 mL离心管，向25 µL Opti-MEM™培养基中加入1 µL Universal Transfection Reagent，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置5分钟；
3. DNA-脂质体复合物制备：将DNA 稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置10分钟，形成DNA-脂质体复合物（溶液可能变得浑浊）；
4. 将DNA-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中进行培养，为保证足够的营养，建议4-6h后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要24-48 h。

优化 DNA 转染：为获得较高的转染效率和较低的细胞毒性，通过改变细胞密度以及 DNA 和Universal Transfection Reagent浓度来优化转染条件。确保细胞汇合度大于 90%，并在1:0.5至1:5的范围内改变DNA (μg) :Universal Transfection Reagent (μL)比。

二、siRNA 转染

（以 24 孔板转染 siRNA 为例的操作步骤）

Day 1 ：:

在500 μL不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到 30-50%。注：在更低密度时进行转染可以让转染和检测之间的时间间隔更长，并且使因细胞过量生长造成的细胞活力损失更小。

Day 2：

1. 将siRNA的储液用DEPC水稀释到20 μM；
2. siRNA 稀释液制备：取1个干净的1.5 mL离心管， 向25 µL Opti-MEM™培养基中加入 1 µL siRNA（20μM）后轻柔混匀，得到 siRNA 稀释液；
3. 转染试剂稀释液制备：另取1个干净的1.5 mL离心管， 向25 µL Opti-MEM™ 培养基中加入1 µL Universal Transfection Reagent，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置5分钟。
4. siRNA-脂质体复合物制备：将siRNA 稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置 10 分钟，形成 siRNA-脂质体复合物（溶液可能变得浑浊）；
5. 将 siRNA-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中进行培养，为保证足够的营养，建议4-6 h后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要48-96 h。

优化siRNA转染：为获得较高的转染效率和较低的非特异性效应，通过改变siRNA和Universal Transfection Reagent浓度来优化转染条件。对于24 孔板，在10-50 pmol siRNA和0.5-1.5 µL Universal Transfection Reagent范围内优化转染条件。根据靶基因和靶细胞的性质，在优化条件时也可考虑以更高密度转染细胞。

三、mRNA 转染

（以 24 孔板转染 mRNA 为例的操作步骤）

Day 1：

在500 μL不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到70-90%。

Day 2：

1. mRNA 稀释液制备：取1个干净的1.5 mL离心管， 向25 µL Opti-MEM™培养基中加入 0.8 µg mRNA 后轻柔混匀，得到 mRNA 稀释液；2. 转染试剂稀释液制备：另取1个干净的1.5 mL离心管，向25 µL Opti-MEM™培养基中加入1.6 µL Universal Transfection Reagent，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置5分钟；

3. mRNA-脂质体复合物制备：将 mRNA 稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置10分钟，形成 mRNA-脂质体复合物（溶液可能变得浑浊）；

4. 将mRNA-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中进行培养，为保证足够的营养，建议4-6 h后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要24-48 h。

优化 mRNA 转染：为获得较高的转染效率和较低的细胞毒性，通过改变细胞密度以及 mRNA 和Universal Transfection Reagent浓度来优化转染条件。确保细胞汇合度大于 90%，并在1:0.5 至1:5的范围内改变mRNA (μg) : Universal Transfection Reagent (μL) 比。

扩大或缩小转染规模

在不同规格培养容器中转染细胞，按表中所示根据相对表面积按比例改变Universal Transfection Reagent、核酸、细胞和培养基的用量。对于自动化、高通量系统，在96孔板中进行转染时，建议采用10 µL的稀释体积。

培养规格	培养基体积	稀释液体积	DNA 转染体系		siRNA 转染体系		mRNA 转染体系
			DNA	Transfection Reagent	siRNA	Transfection Reagent	mRNA	Transfection Reagent
96-well	100 µL	2 × 5 µL	0.1µg	0.2 µL	5 pmol	0.25 µL	0.2 µg	0.4 µL
24-well	500 µL	2 × 25 µL	0.5 µg	1.0 µL	20 pmol	1.0 µL	0.8 µg	1.6 µL
12-well	1 mL	2 × 50 µL	1.0 µg	2 µL	40 pmol	2.0 µL	1.6 µg	3.2 µL
6-well	2 mL	2 × 100 µL	2.5 µg	5 µL	100 pmol	5 µL	4 µg	8 µL
6-cm dish	3 mL	2 × 200 µL	5 µg	10 µL	200 pmol	10 µL	8 µg	16 µL
10-cm dish	10 mL	2 × 500 µL	15 µg	30 µL	600 pmol	30 µL	24 µg	48 µL

四、DNA、siRNA / shRNA 质粒共转染

（以 24 孔板共转染 DNA、siRNA 为例的操作步骤）

Day 1：

在500 μL不含抗生素的生长培养基中对细胞进行铺板，使得转染时的细胞汇合度达到70-90%。

Day 2：

1. 建议将 siRNA 的储液用DEPC水稀释到2 μM（视情况而定）；
2. 核酸稀释液制备：取1个干净的 1.5 mL 离心管，向 25 µL Opti-MEM™培养基中加入 100 ng 质粒 DNA 和2.5 µL siRNA（2 μM）后轻柔混匀，得到核酸稀释液；
3. 转染试剂稀释液制备：另取1个干净的1.5 mL离心管，向25 µL Opti-MEM™培养基中加入 1 µL Universal Transfection Reagent ，轻柔混匀，得到转染试剂稀释液，室温静置5分钟。
4. 核酸-脂质体复合物制备：将核酸稀释液和转染试剂稀释液混合，轻柔混匀，室温静置10分钟，形成核酸-脂质体复合物（溶液可能变得浑浊）；
5. 将核酸-脂质体复合物均匀滴加入细胞中，以十字交叉的方式进行轻柔混匀。随后将细胞培养板放入培养箱中进行培养，为保证足够的营养，建议4-6 h后对细胞进行换液，随后继续培养至鉴定时间，一般需要24-48 h。

建议的试剂用量和体积：

培养规格	培养基体积	稀释液体积	质粒 DNA(ng)	siRNA / shRNA 质粒(pmol / ng)	Transfection Reagent
96-well	100 µL	2 × 5 µL	10-100 ng	0.1-1 pmol / 150-300 ng	0.2-0.5 µL
48-wel	200  μL	2 × 12.5 µL	50-100 ng	0.5-5 pmol / 150-300 ng	0.3-0.8 µL
24-well	500 µL	2 × 25 µL	100-200 ng	1-10 pmol / 300-600 ng	0.5-1.5 µL
12-well	1 mL	2 × 50µL	200-500 ng	2-25 pmol / 600-1500 ng	1-2.5 µL
6-well	2 mL	2 × 200 µL	500-1000 ng	5-50 pmol / 1500-3000 ng	2.5-6 µL