Haokebio™ Universal Bacteria 16S rRNA EUBmix Probe Rapid FISH Kit

【产品信息】

产品名称	产品货号	30T	保存	有效期
洗液*5（粉末溶解于2L ddH2O）	HKR12-1	2L*5	短期4℃长期-20℃	12个月
HRP-鼠抗地高辛（100x）	HKR12-2	30uL
TSA显色液520nm（可选）	HKR12-3	3mL
自动疏水液	HKR12-4	8mL
封闭液	HKR12-5	3mL
16S rRNA Probe	HKR11-6	3mL

【产品简介】

细菌通用16S rRNA EUBmix探针快速检测试剂盒，该试剂盒采用EUBmix混合探针（包含EUB338、EUB338-II、EUB338-III等系列探针），可广谱覆盖各类细菌的16S rRNA保守区。其操作流程简易快速，能显著缩短实验时间，特色在于通过多组EUBmix触发探针与靶序列特异性结合后，暴露扩增序列并引发树枝状杂交链式反应（HCR），形成巨大的核酸聚合物。每条核酸链均标记有地高辛（DIG），最终可通过抗体检测实现显色可视化，兼顾检测全面性与高效性。

【探针信息】

EUB26：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG

EUB338：GCTGCCTCCCGTAGGAGT

EUB338-II：GCTGCCTCCCAGAGGAGT

EUB338-III：GCTGCCACCCGTAGGTGT

EUB516：ACCAGAAGTAGGTAGTCTG

EUB660：CAACGAGCGCAACCCT

EUB820：ATTAGATACCCTGGTAGTCC

EUB927：AAACTCAAAGGAATTGACGG

EUB927：AAACTCAAATGAATTGACGG

EUB927：AAACTTAAAGGAATTGACGG

EUB927：AAACTTAAATGAATTGACGG

EUB930：AGGAATTGACGGGGGCCCG

EUB1195：GAAAGGAAGGTGGTGATGGC

EUB1387：GCTTGTCTCAAAGATTAAGCC

EUB1401：CGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACG

EUB1522：AAGGAGGTGATCCAGCCAC

【组织固定】

组织类型	动物组织	植物组织	冰冻样本	细胞爬片	细胞	肠道	miRNA
处理方式	室温固定12h-24，石蜡包埋。	抽真空固定1h（200mmHg），室温固定12h-24，石蜡包埋。	15%蔗糖4℃脱水8小时，30%蔗糖4℃脱水8小时，OCT包埋。	4°固定2h左右。换pbs运输4°。	细胞沉淀，4℃固定2h，换pbs运输4°，琼脂糖包埋。	卡诺氏固定液室温2h，换70%乙醇运输。	室温固定120h左右，石蜡包埋。

【储存与运输】

冰袋（wet ice）运输；-20℃长期保存,短期于4℃保存，有效期6个月。

【使用方法】

1.1. 自动疏水

每张切片未脱蜡前，滴加100-200ul的自动疏水液，完全覆盖组织，自然干燥后进行后续操作。

注：在脱蜡后，切片上会形成耐高温疏水圈，和后续用组画笔画疏水圈不冲突。

2. 脱蜡至水

依次将切片放入二甲苯Ⅰ15 min-二甲苯Ⅱ15 min-二甲苯Ⅲ15 min-无水乙醇10 min-90%酒精10 min-80%酒精10 min -70%酒精10 min -纯水冲洗。

3. 修复

细胞爬片：用组画笔画出大小合适的疏水圈，将100ul低温修复液(HKI3002)滴于细胞爬片上，室温孵育30min，纯水洗涤3次每次5min，用3%双氧水封闭15min。

注：HKI3002可用蛋白酶K 37℃孵育10min替代。

冰冻切片：用组画笔画出大小合适的疏水圈，在湿盒中水平放置切片。将100ul防掉片修复液(HKI3002)滴于组织上，室温孵育30min，纯水洗涤3次每次5min，用3%双氧水封闭15min。

注：HKI3002可用蛋白酶K 37℃孵育20min替代。

石蜡切片：将装入玻片的玻片架放入修复槽，倒入1x柠檬酸6.0修复液（样本区域须被浸没），盖上盖子，用胶带纸封住，放入微波炉中，中火8min，停8min，中低火8min。自然冷却降温后，用3%双氧水封闭15min。

4. 封闭

取出切片，甩干切片上的液体，用组画笔画出大小合适的疏水圈，在原位杂交仪中或湿盒中水平放置切片，每张切片滴加100ul封闭液，室温孵育30min，洗涤1次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

5. 探针杂交

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的快速探针，37℃孵育2.5h或25℃-37℃孵育过夜，注意保持湿度以防干片。洗涤5次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

6. HRP-鼠抗地高辛

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的HRP-鼠抗地高辛（用免疫组化抗体稀释液HKI3001稀释至1x），25℃-37℃湿盒孵育60min；洗涤5次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

注：HKI3001可用PBS、抗体稀释液等替代。

7. 显色

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的TSA显色液，室温孵育10min。纯水冲洗，终止反应。

8. DAPI染核

每张切片滴加100ul DAPI染液（HKI0005），避光孵育5min，纯水冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片（HKI0007-1）。

9. 抗体和FISH共染

当需要抗体和FISH共染时，先孵育一抗、二抗、TSA显色，显色完后用抗体洗脱液（HKI0045）处理完切片。之后从步骤4开始做FISH实验。

【注意事项】

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅作科研用途。

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