【产品信息】
产品名称 | 产品货号 | 30T | 保存 | 有效期 |
洗液(粉末溶解于10L ddH2O) | HKR12-1 | 10L | 短期4℃长期-20℃ | 12个月 |
蛋白酶K(100x) | HKR12-2 | 30uL |
果胶酶纤维素酶混合液 | HKR12-3 | 3mL |
AP-鼠抗地高辛(100x) | HKR12-4 | 30uL |
NBT显色液A(20x) | HKR12-5 | 150uL |
NBT显色液B(20x) | HKR12-6 | 150uL |
封闭液 | HKR12-7 | 3mL |
探针 | HKR12-8 | 3mL |
放大探针 | HKR12-9 | 3mL |
【产品简介】
RNA杂交试剂盒,适用于大于300bp的RNA原位杂交,特异性好,灵敏度高。试剂盒中包含多对组合式探针,当两个探针结合在目标序列相邻的位置上时,顶部的一小段序列可以触发树叉状HCR形成了一个大分子核酸聚集体,每条核酸链上标记有地高辛,抗体识别地高辛进行显色。
【组织固定】
组织类型 | 动物组织 | 植物组织 | 冰冻样本 | 细胞爬片 | 细胞 |
处理方式 | 室温固定12h,石蜡包埋。 | 抽真空固定1h,室温固定12h,石蜡包埋。 | 15%蔗糖溶液中,4℃脱水8小时,换30%蔗糖溶,液4℃脱水8小时,OCT包埋。 | 4°固定2h左右。 | 贴壁细胞用PBS清洗,加入多聚甲醛,将细胞刮下来,收集到离心管中,4℃固定2h,PBS清洗,琼脂糖包埋。 |
种类 | mRNA | lncRNA | circRNA | miRNA | rRNA | |
处理方式 | 室温固定12h | 室温固定12h(小于300bp固定24h) | 室温固定12h | 室温固定12h | 室温固定12h(小于300bp固定24h) | |
【储存与运输】
冰袋(wet ice)运输;-20℃长期保存,短期于4℃保存,有效期6个月。
【使用方法】
1. 脱蜡至水
依次将切片放入二甲苯Ⅰ15 min-二甲苯Ⅱ15 min-二甲苯Ⅲ15 min-无水乙醇10 min-90%酒精10 min-80%酒精10 min -70%酒精10 min -纯水冲洗。
2. 酶修复
等待切片完全干燥后,用组画笔(推荐HKR14P原位杂交专用组画笔)画出大小合适的疏水圈,在原位杂交仪中或湿盒中水平放置切片,将100ul果胶酶纤维素酶混合液滴于组织上,37℃孵育30min,纯水冲洗终止反应。甩干切片上的液体,将100ul蛋白酶K修复液(1X)滴于组织上,37℃孵育30min,纯水冲洗终止反应。
3. 封闭
甩干切片上的液体,每张切片滴加100ul封闭液,37℃孵育30min,洗涤1次,每次5min。洗涤步骤:将装入玻片的玻片架放入洗液缸,倒入洗液(样本区域须被浸没),置于摇床上5min,转速为60。
4. 探针杂交
甩干切片上的液体,每张切片滴加100ul的探针,37℃孵育3h或过夜,注意保持湿度以防干片。洗涤5次,每次5min。洗涤步骤:将装入玻片的玻片架放入洗液缸,倒入洗液(样本区域须被浸没),置于摇床上5min,转速为60。
5. 探针放大
甩干切片上的液体,每张切片滴加100ul的放大探针,37℃孵育1.5h,注意保持湿度以防干片。洗涤5次,每次5min。洗涤步骤:将装入玻片的玻片架放入洗液缸,倒入洗液(样本区域须被浸没),置于摇床上5min,转速为60。
6. AP-鼠抗地高辛
甩干切片上的液体,每张切片滴加100ul的AP-鼠抗地高辛(1x),37℃湿盒孵育40min;洗涤5次,每次5min。洗涤步骤:将装入玻片的玻片架放入洗液缸,倒入洗液(样本区域须被浸没),置于摇床上5min,转速为60。
7. 显色
每张切片滴加100ul的显色液(1mL去离子水加50ul显色液A和50ul显色液B),室温孵育20min。纯水冲洗,终止反应。自然风干后,滴加封片剂封片。
【注意事项】
1. 本产品仅作科研用途。
2.为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
【说明书下载】
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