【产品信息】

【产品简介】

miRNA、circRNA杂交试剂盒，包含组合式探针、预放大结构、放大探针，当两个探针结合在目标序列相邻的位置上时，顶部的一小段序列可以结合预放大结构，预放大结构上的重复序列可以触发树叉状HCR形成了一个大分子核酸聚集体，每条核酸链上标记有地高辛，抗体识别地高辛进行显色。

【组织固定】

【储存与运输】

冰袋（wet ice）运输；-20℃长期保存,短期于4℃保存，有效期6个月。 

【使用方法】

1. 脱蜡至水

依次将切片放入二甲苯Ⅰ15 min-二甲苯Ⅱ15 min-二甲苯Ⅲ15 min-无水乙醇10 min-90%酒精10 min-80%酒精10 min -70%酒精10 min -纯水冲洗。

2. 酶修复

等待切片完全干燥后，用组画笔（推荐HKR14P原位杂交专用组画笔）画出大小合适的疏水圈，在原位杂交仪中或湿盒中水平放置切片，将100ul蛋白酶K修复液(1X)滴于组织上，37℃孵育30min（细胞样本孵育15min），纯水冲洗终止反应。

3. 封闭

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul封闭液，37℃孵育30min，洗涤1次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

4. 探针杂交

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的探针，37℃孵育3h或过夜，注意保持湿度以防干片。洗涤5次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

5. 预放大杂交

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的预放大探针，37℃孵育3h或过夜，注意保持湿度以防干片。洗涤5次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

6. 探针放大

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的放大探针，37℃孵育1.5h，注意保持湿度以防干片。洗涤5次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

7. HRP-鼠抗地高辛

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的HRP-鼠抗地高辛（1x），37℃湿盒孵育40min；洗涤5次，每次5min。洗涤步骤：将装入玻片的玻片架放入洗液缸，倒入洗液（样本区域须被浸没），置于摇床上5min，转速为60。

8. 显色

甩干切片上的液体，每张切片滴加100ul的TSA显色液，室温孵育10min。纯水冲洗，终止反应。

9. DAPI染核

每张切片滴加50ul DAPI染液，避光孵育5min，纯水冲洗后滴加抗荧光淬灭封片剂封片。

【注意事项】

1. 本产品仅作科研用途。

2.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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