miRNA检测

　　简介：荧光定量PCR是通过荧光染料(SYBR Green)或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。可以用于检测mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA的基因表达水平。最终所得的PCR产物可以通过琼脂糖凝胶电泳进一步验证引物特异性。

　　实验流程：

　　1.接收样本

　　2.组织匀浆、细胞和血液样本吹打裂解-RNA提取-RNA浓度测定—逆转录成cdna—荧光定量PCR-(PCR产物电泳)-数据分析

　　其中mRNA为普通逆转录，lncRNA可选采取普通和特异性逆转录，circRNA和miRNA采取特异性逆转录

　　3.交付结果：完整项目报告(扩增曲线、数据分析、引物信息、实验报告)

　　实验周期：60个循环内，7个工作日内出结果

　　样品要求：

　　1、组织： 100mg(黄豆大小)，最少50mg(绿豆大小)，脂肪组织，结缔组织，纤维化组织适当增加。

　　2、细胞：1×10^6个细胞,贴壁细胞舒展，未变圆;

　　3、全血：2mL，最少1mL新鲜血液EDTA抗凝管;

　　4、血清：2mL，干冰运输;

　　5、植物：叶、果肉、种子等需100mg，最少50mg。

　　6、RNA样品：纯度OD260/280 比值为1.8-2.0，浓度≥500ng/ul，体积≥20ul。

　　7、cdna：cdna原液20uL。

　　样本运输：可选择以下任何一种方式寄送标本

　　1.动植物组织样本、细胞样本、血清、RNA、cDNA以干冰运输;

　　2.细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、灌满培养液不漏出)，常温运输;

　　3.全血样本是EDTA抗凝管4度运输。