免疫荧光/IF

  项目介绍

  免疫荧光(immunofluorescence,IF),通常是指用荧光标记的抗体示踪或检查样品中相应抗原的方法。根据抗原抗体反应,将不影响抗原抗体相互作用的荧光分子标记在抗体上,与其相应的抗原反应后,在荧光显微镜下针对荧光标记分子的激发光发射光进行观察,从而检测目的指标的相对含量、在组织细胞中的定位。

  赛维尔生物具有先进的双重或多重荧光标记染色技术,利用免疫学和细胞化学原理,在同一张切片上同时采用不同颜色的荧光色素或酶促产物来原位示踪组织或细胞内不同 抗原大分子物质的一项标记染色技术。简单来说就是在同一张切片上对多个抗原进行标记。本公司切片扫描仪配:DAPI、FIFC/fluro-488、 CY3、CY5、TXred(594nm)5通道,可完成多色荧光图像采集。

  抗体之外,利用荧光染料本身同组织细胞中待测物质结合、观测其荧光,也常用于生物学研究中,如JC-1、DHE、尼罗红、EDU、鬼笔环肽、FJB、麦胚凝集素(WGA)等。

  应用

  免疫荧光技术已广泛应用于生命科学研究,可用于目标蛋白在特定组织细胞中的定性、定位检测,通过特定染料还能定位线粒体、溶酶体、内质网等细胞器。在临床检验中用作细菌、病毒、自身抗体的检测。组织中标志物的检测鉴定,反映组织细胞的生理功能状态,组织的衰老凋亡或者细胞增殖、增生。

  基本实验流程

免疫荧光/IF

  结果展示

免疫荧光/IF

  样本运输保存

实验项目 标本要求 标本保存运输条件 可能存在风险 建议
石蜡切片 客户提供石蜡切片的,该切片放置时间不能超过半年 常温 放置超过了半年的石蜡切片存在抗原丢失的可能性,结果可能为阴性或阳性较低 如果有蜡块最好提供蜡块重新切片
冰冻切片 1. 厚度不要超过10um;
2. 提供的冰冻切片放置时间不能超过三个月;
-20℃ 1.20um厚的冰冻切片, 很容易掉片。
2、20um 厚的冰冻切片抗体不易进入导致假阴性结果
3. 放置超过三个月的冰冻切片,抗原丢失很严重。
1. 提供组织样品改做石蜡切片或者重新冰冻切片8-10um。
2. 放置超过三个月的切片建议重新切片
细胞爬片 1. 细胞密度合适(最好是105),状态要好。
2. 最好爬在24*24 的爬片上,不要把细胞直接爬在板子上,组化不接12 孔板或者孔径更小的培养板
4℃,只要不是一定要做活细胞的项目,建议固定好细胞, 换成PBS 运输。 爬片操作过程中 ,细胞不可避免的会有少数脱落。如果原本细胞数量就少,那么做完后,可能会发现细胞没了。 1.超过一周的细胞爬片,可能长菌。爬片一次性做完,保存不超过一周。
2. 细胞数量:6 孔板细胞密度到达50%~70%。
3. 细胞没有制成爬片,直接长板孔,不能封片拍照。
细胞悬浮液, 做滴片 细胞固定好,换成PBS,离心后要保证细胞沉淀至少肉眼可见 把细胞悬浮液用EP 管装着, 4℃保存运输 有的客户提供的细胞量太少,离心后,看不到明显沉淀,滴片制好后, 发现没细胞 离心后需肉眼可见细胞沉淀。
做活细胞的特殊染色: 
1、ROS(活性氧) 
2.MTR(线粒体) 
3.JC-1(线粒体膜电位)
新鲜或冷冻组织冰冻切片或 活细胞 冰冻切片-20℃ 保存。如果要做活细胞染色, 则提供瓶装细胞,给我们公司细胞房培养, 制成爬片。 活细胞实验操作过程中可能会脱落,尤其是做过药物或损伤等处理的细胞脱落更严重,实验结果可能存在细胞较少的情况 在我司培养细胞及处理。
4.FJB(染坏死神经元) 
5.WGA(染心肌细胞膜) 
6. 硫磺素(染淀粉样蛋白)
石蜡切片或冰切切片 石蜡切片常温保存。冰冻切片-20℃保存。 FJB 染坏死神经元,硫磺素染淀粉样蛋白,这两种染色都对标本造模有要求。模型不符合要求的,可能染不出来。  
7.BODIPY (脂滴荧光染色) 冰冻切片和细胞爬片都可以做。 按照冰冻切片和细胞爬片的条件即可。    
8. 鬼笔环肽(细胞骨架染色) 只能做细胞爬片 固定好细胞, 换成PBS,4℃ 运输到实验室。    
9.Hochest (细胞核染色) 
10.EDU(细胞增殖检测) 
11.BRDU(细胞增殖检测)
石蜡切片,冰冻切片, 细胞爬片,都能做。   BRDU,EDU 检测之前需动物活体注射化学试剂brdu 或edu,细胞需用化学试剂brdu 或edu 处理造模,否则无阳性。 1. 造模的问题,需要跟客户确认清楚。
2. 价格问题,EDU 操作费是100 块一张片子。

  价格

服务项目 价格
免疫荧光单标(双色)+DAPI 45元/张
免疫荧光双标(三色)+DAPI 65元/张
免疫荧光三标(四色)+DAPI 150元/张
免疫荧光四标(五色)+DAPI 300元/张
芯片免疫荧光单标(双色)+DAPI 200元/张
芯片免疫荧光双标(三色)+DAPI 300元/张
尼罗红染色(含荧光拍照) 45元/张
ROS 染色 45元/张
FJB 染色 50元/张
WGA 染色 65元/张
鬼笔环肽染色 65元/张
BrdU 染色 65元/张
EdU 染色 100元/张
DAPI 染色 45元/张
Hoechst 染色 45元/张
PI 染色 45元/张
MTR染色 45元/张
Fluorescent Brightener 28染色 45元/张

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