流式表抗-双标

　　简介：

　　流式表抗：使用抗原-抗体反应的原理，运用流式细胞仪，检测细胞表面抗原或者胞内抗原的实验方法。另外，对于同一样品检测不同种抗原，可以分为单标、双标、三标。

　　按照抗体是否直接标记荧光，可以分为直接标记法和间接标记法。

　　实验流程：

　　1、收集细胞：弃去上清，加入1 ml PBS清洗一次，弃上清，再加入1 ml 0.25%胰酶消化细胞，待细胞变圆且有部分细胞悬浮，即加入PBS终止消化。用移液枪轻轻吹打细胞，使细胞悬浮。细胞悬液转入离心管中，1500 rpm离心5 min收集细胞。

　　2、PBS洗涤细胞：加入3 ml 4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1500 rpm离心5 min，弃上清。沉淀震荡混匀。

　　3、抗体标记

　　1)直接标记法标记：加入100 µl直标抗体稀释液(PBS配制)，避光染色30 min。

　　2)间接标记法标记：

　　加一抗：加入100 µl一抗抗体稀释液(PBS配制)，室温孵育60 min。

　　加二抗：孵育完后用预冷的PBS洗涤1次，1500 rpm离心5 min，弃上清。加入100 µl二抗抗体稀释液(PBS配制)，避光室温孵育30 min。

　　4、PBS洗涤细胞：加入500 ul 4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1500 rpm离心5 min，弃上清。沉淀震荡混匀，用200 μL的4℃预冷的PBS重悬细胞。
 

　　客户提供信息：

　　1.提供抗体货号及厂家

　　2.细胞信息

　　3.实验要求
 

　　样本寄送须知：

　　细胞常温，血样4度运输
 

　　交付结果：

　　实验结果展示：
 

流式表抗-单标结果

流式表抗-双标结果