双萤光素酶报告基因

　　简介：

　　报告基因 (reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，也就是说，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控。

　　本实验采用萤火虫萤光素酶(Firefly Luciferase)和海肾萤光素酶(Rellina Luciferase)组成双萤光素酶报告基因实验系统(Dual-Luciferase Reporter Assay)。通过加入特定的萤光素酶底物，萤光素酶与底物反应过程中会发出生物萤光，然后可以通过化学发光仪测定反应过程中释放的生物萤光，从而比较不同组间基因表达的差异。

　　实验应用：

　　1)miRNA与靶基因3’UTR的靶向关系

　　2)转录因子/启动子活性研究
 

　　实验流程：

　　1、重组质粒构建: 制备含有待检测基因-Luc/Rluc的重组质粒;

　　2、细胞系选择: 根据实验需要选择细胞株，通常选择转染效率较高的293T细胞;

　　3、共转染: 将带有Luc/Rluc标记的报告基因和目的基因进行共转染，可设置不同的检测时间点检测

　　4、外界干预: 转染后，可选择性进行物理/化学/病毒等的相应刺激;

　　5、细胞处理: 采用进口双萤光素酶检测试剂盒依照protocol操作;

　　6、萤光检测: 使用bio-teck 酶标仪进行萤光强度检测

　　7、数据整理，结果分析
 

　　客户提供信息：

　　1.预测的启动子或miRNA序列信息及结合位点;

　　2.靶基因信息;

　　3.载体选择;

　　4.实验分组等细节;

　　5.其他实验需求
 

　　公司可供选择的载体：
 

　　样本寄送须知：

　　1.活细胞：一定要不透气方瓶寄，常温;

　　2.冻存细胞：纯干冰件，保证干冰充足

　　3.质粒、miRNA等-20℃寄送
 

　　交付结果：

　　实验报告，原始结果，分析结果
 

　　实验周期：

　　4-6周左右
 

　　实验结果展示：

Fig. Dual-luciferase Reporter Assay
 

　　试剂盒展示：

　　左图：试剂盒外观照;右图：试剂盒反应图示
 

　　酶标仪展示：