精子冻存

一、服务介绍

　　由客户提供转基因或基因敲除雄鼠，将该小鼠精子采集后，采用程序降温的方法进行冷冻，保存在液氮中。

二、实验步骤

　　1、雄鼠要求：阳性纯合子雄鼠，12～18W(最佳)，生育能力良好，在实验前7d内进行过成功交配，而在3d内未交配过；

　　2、取下雄鼠附睾后放入盛有矿物油的培养皿内清洗。在滤纸(吸水纸)上剔除附睾上的脂肪和血，体视显微镜观察是否干净。在精子冻存液R18S3滴清洗附睾，体视显微镜下将附睾剪碎，每隔一分钟轻摇几下，让精

子自由散开。取 10μL 精子，放在培养皿上(可以一次多取几滴)。用连接1ml注射器的三通阀依次吸入 HTF，空气，10μL精子，空气，上端吸到过滤塞处，下端用打火机封口。将麦管放入麦管保护套内，麦管套放入液氮

前要先扎数孔，10min后放入液氮罐内即可。

三、注意事项

　　1、注意雄鼠选取要求

　　2、麦管套放入液氮前要先扎数孔防止爆炸

四、结果展示
 

图a：卵子团
图b：受精后的卵子
图c：2细胞期胚胎
图d：未受精的单细胞