蛋白质鉴定

　　Nano LC-MS/MS技术是当前鉴定凝胶(包括二维凝胶)分离的蛋白胶带最灵敏、最可靠的方法。与MALDI-TOF的蛋白质鉴定方法相比，NanoLC-MC/MS具有更高的灵敏度和几乎100%的可靠性，而且具有MALDI-

TOF不可比拟的从单一蛋白质胶带中准确鉴定出多个蛋白质组分的能力。

　　质谱鉴定的原理则是基于鸟枪法(Shot-gun)：将蛋白条带或者蛋白溶液酶切成肽段混合物，经高效液相色谱分离得到若干较为简单的组分，再在线导入高分辨率质谱仪中进行分析。肽段在质谱仪中离子化后，会带

上一定量的电荷，通过检测器分析，可得到各肽段的质荷比(m/z)，从而得知各肽段的相对分子质量。为获得肽段的序列信息，质谱仪会选取某些肽段进行破碎，再次分析，获得二级质谱，检索软件根据二级质谱信息

与相应的数据库比对，结合匹配度打分及错配过滤，可得到肽段的确切序列，进而拼接出各蛋白的完整序列，从而实现对蛋白的鉴定。

　　主要设备：质谱仪 Thermo Q Exactive / AB Secix 5600+

二、应用

　　可用于多种类型样品中蛋白质的鉴定，包括：1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条，2DE PAGE中的蛋白胶点，蛋白表达产物，免疫共沉淀(Co-IP)样品，组织全蛋白谱，蛋白溶液样本等。

三、样品保存运输

　　1、胶点/胶条样本
　　①蛋白量大于100ng，4℃保存，冰袋运输。
　　②收集时，用双蒸水对胶块进行清洗，采用干净刀片将目的条带区域（避免带入空白或非目的区域）切下，装入EP管中保存。
　　③考染胶条，需要条带肉眼清晰可见，银染胶条不建议进行蛋白质鉴定（银染需专用质谱兼容试剂盒银染）。
　　④不同条带不建议混合处理，避免干扰。
　　⑤提供样本时需提供胶块考染图和样品取点图。

　　2、蛋白溶液样本

　　①蛋白量至少大于10ug，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②建议测定蛋白浓度后，液氮速冻，避免蛋白降解，另外需要告知蛋白溶液的缓冲液成分和浓度，方便实验室收到后进行后续处理。
　　③样本若为IP实验后磁珠-抗体-蛋白复合物，注意不要加入loading buffer，应采用wash buffer清洗后，离心去掉上清，重复三次，再使用PBS冲洗磁珠三次，去上清，收集磁珠沉淀。

　　3、细胞样本

　　①细胞量1×10⁷个，收集细胞沉淀，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

　　4、血清样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②样本应尽量避免溶血。

　　5、血浆样本

　　①样本量500uL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②样本应尽量避免溶血。

　　6、尿液样本

　　①样本量2mL，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②样品应尽量避免带入粪便残渣。

　　7、动物组织样本

　　①样本量300mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面血液，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。
　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　8、植物组织样本

　　①样本量500mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②收集时，用预冷PBS缓冲液冲洗表面泥沙，并用滤纸吸干多余水分，避免冻存时结冰。
　　③固定液浸泡过的样本无法进行检测。

　　9、微生物样本

　　①样本量干重200mg，-80℃保存，纯干冰运输，避免反复冻融。
　　②收集时，用预冷PBS缓冲液清洗三次，去除培养基成分，然后离心去除上清保存。

四、结果展示

 
五、价格列表