免疫荧光四标（芯片）

免疫荧光分子病理实验服务

价格￥2000
单位张
货号HKF2023
品牌浩克

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【产品信息】

产品名称	产品货号	规格	价格
免疫荧光四标（芯片）	HKF2023	张	2000元

石蜡切片免疫荧光实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%
酒精6min蒸馏水洗。
2、 抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复液（PH6.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min
停火8min中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、 阻断内源性过氧化物酶：切片加上3%的双氧水，室温孵育25min，将玻片置PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。
5、 加一抗：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加按一定比例稀的抗体覆盖组织。切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。
6、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
7、 信号放大:将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。滴加相对应颜色Flare信号放大试剂，3-5min.将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。双标或者多标的实验从这一步结束后重复步骤2-7，标记第二个、或者第三个抗体，最后在进入步骤8即可。
8、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加
DAPI染液，避光室温孵育10min。
9、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。