石蜡切片 dab tunel实验报告

一、实验器材及试剂

1. 实验器材

• 主要实验试剂

• 石蜡切片tunel实验步骤
• 脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ8 min-二甲苯Ⅱ8min-二甲苯Ⅲ8min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗2min。 
• 微波修复:切片放入装满柠檬酸（6.0）修复液的修复盒中，微波修复中火8min，室温自然冷切，双蒸水洗涤3次，每次5min。
• 组织画圈：切片稍干后沿着组织用组化笔沿着组织外围轮廓画一个与组织间隔3-4毫米的小圈，画完后用纯水洗涤3次，每次5min。
• 配试剂工作液以及孵育：白光 tunel 反应液和 TdT 酶按 100:1比例混合，此液为 tunel 工作液，将 tunel 工作液加入到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃恒温箱孵育1小时（具体需要预实验），湿盒内加少量水保持湿度。
• hrp 二抗孵育以及 DAB 显色：玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3 次，每次 5min，然后 hrp 二抗工作液室温孵育 30min（hrp 二抗工作液，Streptavidin-HRP：PBST=1:500），；玻片置于 PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤 3次，每次 5min；
• DAB显色：切片稍甩干后在圈内滴加（稀释液和浓缩液1000:50配制）新鲜配制的DAB显色液，显微镜下控制显色时间，阳性为棕黄色，纯水冲洗切片终止显色。
• 复染细胞核：苏木素染色40s左右，自来水洗，苏木素分化液分化2秒，自来水冲洗，苏木素返蓝液返蓝10s，流水冲洗。
• 脱水封片：将切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min –无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二甲苯Ⅰ5min 中脱水透明，将切片从二甲苯拿出来稍晾干，中性树胶封片。
• 显微镜镜检，图像采集分析。

• 结果判读：

苏木素染出细胞核为蓝色，DAB显出的阳性表达为棕黄色

• 注意事项：

1． 注意切片脱蜡是否彻底；

2． 实验过程中切片勿干片；

3.  实验操作中小心枪头挂伤组织。