大肠杆菌裂解液

其他 试剂

• 价格￥580
• 规格100ml
• 货号HKW3005
• 单位瓶
• 品牌HaoKebio

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【产品简介】

大肠杆菌裂解液，适用于大肠杆菌菌体的快速、温和、低成本裂解，释放菌体内蛋

白。本产品为单组份，操作简单、重复性好。含有的复合溶菌酶可以在 1 分钟内破开细

菌细胞壁，将其降解为胞壁二糖；含有的核酸酶可在 1 分钟内消化细菌的 DNA 和 RNA，

将其降解为寡聚核苷酸片段。使用本产品可以有效降低细菌裂解后上清粘度，抑制目的

蛋白的降解，提高后续样品澄清效果，提升样品上柱纯化的效率，减少内毒素污染。

【储存与运输】

冰袋(wet ice) 运输。短期内(60 天)可放置于 2-8 ℃保存，长期保存可冻存于- 20 ℃

或- 80 ℃，避免反复冻融，12 个月有效。

【使用方法】

1. 菌体收集

a.对细菌进行培养，诱导表达目的蛋白。

b. 通过离心、超滤等适当方法，去除发酵液上清，收集菌体，对菌体进行称重，

记录重量。

2. 菌体裂解

a.按照1g湿菌体加入9mLTris-HCl缓冲液(如TBS缓冲液：20mMTris，150mMNaCl，

pH7.6)的比例，对菌体进行重悬，确保分散充分，可采用旋涡震荡、磁力搅拌等

手段。缓冲液不推荐磷酸盐(PBS)，因其会抑制核酸酶活性，但抑制作用并不明

显，如果使用 PBS 缓冲液，请适当延长裂菌时间。

b. 按照菌体重悬液体积的 1/9(V/V，例如：使用了 9mLTBS 缓冲液重悬，就加 1mL

裂菌液)加入大肠杆菌裂解液，搅拌或振荡混合均匀。

c.将样品置于 4-25℃条件下(温度根据蛋白稳定性进行合理选择)，裂解 1-10 分钟，

会看到菌体悬液渐渐变清亮透明。如果目的蛋白可溶，可以选择快速裂解，约 1

分钟即可释放 80%以上的目的蛋白至上清中；如果目的蛋白是包涵体，可以选

择更长裂菌时间，尽量充分消化细胞壁，以便获得纯度更高的包涵体。

d. 使用离心(离心力＞8000g)的方法，分离上清与沉淀。如果目的蛋白为可溶蛋白，

取上清进行后续纯化；如果目的蛋白是包涵体，收集沉淀样品，对沉淀中的包

涵体进行洗涤、变性溶解，再使用适当方法进行纯化。

【注意事项】

1. 本产品与 MBP-tag 纯化体系不兼容。其它常见的 His-tag、GST-tag、TactinII-tag、FC-tag、

S-tag、proteinA-tag、CBD-tag 等技术体系不受影响。

2. 本产品使用了温和的非离子型去垢剂，不会造成蛋白失活，使用的复合溶菌酶以及超

级核酸酶均不带纯化标签，不会干扰下游纯化。

3. 实验室最常用的诱导剂为 IPTG，通常使用终浓度为 10μM-1mM，诱导剂浓度对于目

的蛋白的溶解性影响并不大，不用在摸索诱导剂浓度上浪费时间，我们推荐使用 0.1mM

IPTG 的诱导浓度。若希望改善可溶比例，优先考虑低温以及增加促溶标签。乳糖也可

以很好的诱导特定启动子的表达，最终收获的菌量会比 IPTG 更高。在 LB 培养基中，

37℃诱导，通常 4 小时目的蛋白表达量即达到高峰，可以收集菌体。如果使用低温诱导，

诱导时间可适当延长至 6-8 小时。过夜诱导对于大部分蛋白的表达并没有明显的收益，

菌量增加很少但降解条带增多。

4. 实验室的 LB 培养基表达，每升可以收获菌体约为 3g，如果是发酵罐高密度发酵，每

升培养基可以收获菌体 100g。收获的菌体暂时不用，需要保存在-20℃或-80℃条件，防

止降解。

5. 对于使用 LB 培养基进行摇瓶培养，可以按照每升收获的菌体加入 27mL TBS 缓冲液，

低温震荡或者超声清洗槽内超声分散完全后加入 3mL 大肠杆菌裂解液，震荡混匀即可

看到菌体悬浊液逐渐澄清。

6. 菌体裂解在最优条件下 1 分钟即可以完成，如果缓冲液不合适，比如含有磷酸盐、含

有高盐、pH 偏离中性等，裂解速度会变慢。如果赶进度，可以去离心，对可溶目的蛋

白的释放影响不大，离心之后，核酸酶与溶菌酶留在上清中，可以继续消化。如果不赶

进度，可以适当延长裂菌时间。

7. 室温 20-25 ℃条件下，裂菌液含有的酶活力较高，但通常推荐 4℃低温裂菌，以控制

目的蛋白的降解。

8. 离心之后，通常样品已经得到充分澄清，并不需要再做深层过滤或者膜包过滤；如果

样品不够澄清，可以考虑增加其它澄清步骤。

9. 大肠杆菌裂解液把核酸酶与溶菌酶整合到了一个溶液中，使用更加简洁，无需再添加

额外的超级核酸酶。但加入裂菌液之前，菌体要分散充分，这样更有利于裂菌。

10. 大肠杆菌裂解液不含有螯合剂 EDTA, 所以不会造成镍离子的脱落，但通常考虑到

后续放大的重复性，在使用镍亲和填料体系的时候，推荐使用第三代 NiSmart 亲和填料，

这一产品高度耐碱清洗，不用每次使用都进行再生。