甲基化检测BSP

　　标本要求：组织、细胞、血液、其它

　　实验周期：3周~4周

　　收费价格：每个样品每个基因800元，每个基因1对引物费70元

　　产品介绍：亚硫酸氢盐处理后测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是检测基因甲基化的经典方法,其原理为:用亚硫酸氨钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变。随后设计BSP引物进行PCR,在扩增过程中尿密啶全部阵专化为胸腺嘧啶,最后,将PCR产物克隆至载体后进行测序,并且与未经处理的序列比较,判断是否CpG位点发生甲基化,这种方法称为BSP-克隆测序法。此方法是精确度很高,能明确目的片段中每一个CpG位点的甲基化状态。一般会选取10个克隆子测序。

　　实验流程

　　(1) 样本接收:组织、细胞、血液、其它

　　(2) 实验步骤: DNA提取-亚硫酸氢盐处理-纯化DNA-PCR扩增-TA克隆-测序

　　(3) 实验结果:完整项目报告(材料、试剂、仪器、方法、数据分析、实验结果)

　　注意事项：

　　1、组织样品:新鲜组织放入液氮或-80度保存,组织不少于100mg,低温运输

　　2、培养细胞:通过细胞计数取不少于2×10⁶个细胞于EP管,收集细胞沉淀后,液氮速冻,低温保存或运输(-80℃,避免反复冻融);

　　3、血液标本:以抗凝管保存血样(4℃保存3~5天,如果要长时间保存需放在-80℃);

　　4、DNA样品:纯度OD260/280比值为1.8-2.0,浓度≥50ng/ul,体积≥50ul。

　　5、样本运输:可选择以下任何一种方式寄送标本

　　　a组织样本、细胞样本以干冰运输;

　　　b.细胞样本也可直接寄送培养瓶(密封保证不污染、培养液不漏出);

　　6、提供详细的基因信息, BSP方法要求待测序列在350bp左右。我们会根据客户的基因序列信息设计引物,并在方案实验过程中随时与客户沟通。