Von kossa染色

  一、实验器材及试剂

  1、实验器材

名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 GFL-230
载玻片 haokebio  
正置光学显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse E100
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

  2、主要实验试剂

试剂 厂家 货号
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司 100092683
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司 10023418
Von-Kossa染液套装 haokebio G1043
分化液 servicebio G1005-3
返蓝液 servicebio G1005-4
中性树胶 国药集团化学试剂有限公司 10004160

 

  二、实验步骤

  1、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲苯Ⅰ20min-二甲苯Ⅱ20min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-75%酒精5min,自来水洗,蒸馏水洗三遍。

  2、XSY反应:切片滴加XSY溶液,用紫外灯连续照射2-3小时,蒸馏水洗多遍;

  3、苏木素染色:切片入苏木素染液染3-5min,自来水洗,分化液分化,自来水洗,返蓝液返蓝,流水冲洗。

  4、伊红染色:85%、95%的酒精梯度脱水各5min,入伊红染液5min;

  5、脱水封片:切片依次放入无水乙醇I 5min -无水乙醇II 5min-无水乙醇Ⅲ5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min透明,中性树胶封片。

  6、显微镜镜检,图像采集分析。

 

  三、染色判读:

  钙盐沉积区域呈黑色或棕黑色,细胞核呈蓝色,背景呈红色。

 

  四、注意事项:

  1、XSY溶液滴染前,切片必须用蒸馏水洗干净;

  2、如果没有紫外灯,也可以用强太阳光照射。

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