高尔基染色(含多层染色)

  一、实验器材及试剂

  1、实验器材

名称 厂家 型号
脱水机 武汉俊杰电子有限公司 JJ-12J
包埋机 武汉俊杰电子有限公司 JB-P5
病理切片机 上海徕卡仪器有限公司 RM2016
冻台 武汉俊杰电子有限公司 JB-L5
组织摊片机 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 KD-P
烤箱 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 GFL-230
载玻片 haokebio  
正置光学显微镜 日本尼康 Nikon Eclipse E100
成像系统 日本尼康 Nikon DS-U3

  2、主要实验试剂

试剂名称 厂家 货号
蔗糖 国药集团化学试剂有限公司 57-50-1
无水乙醇 国药集团化学试剂有限公司 100092683
二甲苯 国药集团化学试剂有限公司 10023418
高尔基染液套装 haokebio  
中性树胶 国药集团化学试剂有限公司 10004160

 

  二、实验步骤

  1、取材固定:将老鼠杀死后,立刻取脑组织置于4%的多聚甲醛液中固定24h以上。

  2、高尔基染色:用生理盐水将脑组织轻轻漂洗几遍,将需要的实验部位切成2-3mm厚的脑组织块,高尔基染液将脑组织块完全浸没,放置阴凉通风处避光处理14天,浸泡48h后,换一次新染液,之后每隔3天换一次新染液。

  3、组织块脱水:将组织块取出,置于15%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水约1天,取出组织块,置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2天。

  4、显影:将组织块取出,蒸馏水洗1min,浓氨水处理45min,蒸馏水洗1min,定影液处理45min,蒸馏水洗1min。

  5、脱水冰切封片:置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2-3天,冰冻切片100um,甘油明胶封片,拍照保存结果。

  6、显微镜镜检,图像采集分析。

 

  三、结果判读:

  神经元呈黑色,胶质细胞呈黑色,背景灰色或者棕黄色。

 

  四、注意事项:

  1、染液配制的量需要根据实际情况来定,配制过多易造成浪费。

  2、染液一定要避光保存,并且实验过程中的每一步操作都要求避光。

  3、染色完成后,若客户需要返还组织块,将剩余组织块放在30%的蔗糖中4℃避光运输。

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