一、实验器材及试剂
1、实验器材
名称 | 厂家 | 型号 |
脱水机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JJ-12J |
包埋机 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-P5 |
病理切片机 | 上海徕卡仪器有限公司 | RM2016 |
冻台 | 武汉俊杰电子有限公司 | JB-L5 |
组织摊片机 | 浙江省金华市科迪仪器设备有限公司 | KD-P |
烤箱 | 天津市莱玻瑞仪器设备有限公司 | GFL-230 |
载玻片 | haokebio | |
正置光学显微镜 | 日本尼康 | Nikon Eclipse E100 |
成像系统 | 日本尼康 | Nikon DS-U3 |
2、主要实验试剂
试剂名称 | 厂家 | 货号 |
蔗糖 | 国药集团化学试剂有限公司 | 57-50-1 |
无水乙醇 | 国药集团化学试剂有限公司 | 100092683 |
二甲苯 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10023418 |
高尔基染液套装 | haokebio | |
中性树胶 | 国药集团化学试剂有限公司 | 10004160 |
二、实验步骤
1、取材固定:将老鼠杀死后,立刻取脑组织置于4%的多聚甲醛液中固定24h以上。
2、高尔基染色:用生理盐水将脑组织轻轻漂洗几遍,将需要的实验部位切成2-3mm厚的脑组织块,高尔基染液将脑组织块完全浸没,放置阴凉通风处避光处理14天,浸泡48h后,换一次新染液,之后每隔3天换一次新染液。
3、组织块脱水:将组织块取出,置于15%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水约1天,取出组织块,置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2天。
4、显影:将组织块取出,蒸馏水洗1min,浓氨水处理45min,蒸馏水洗1min,定影液处理45min,蒸馏水洗1min。
5、脱水冰切封片:置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2-3天,冰冻切片100um,甘油明胶封片,拍照保存结果。
6、显微镜镜检,图像采集分析。
三、结果判读:
神经元呈黑色,胶质细胞呈黑色,背景灰色或者棕黄色。
四、注意事项:
1、染液配制的量需要根据实际情况来定,配制过多易造成浪费。
2、染液一定要避光保存,并且实验过程中的每一步操作都要求避光。
3、染色完成后,若客户需要返还组织块,将剩余组织块放在30%的蔗糖中4℃避光运输。
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