高尔基染色（含多层染色）

　　一、实验器材及试剂

　　1、实验器材

　　2、主要实验试剂

　　二、实验步骤

　　1、取材固定：将老鼠杀死后，立刻取脑组织置于4%的多聚甲醛液中固定24h以上。

　　2、高尔基染色：用生理盐水将脑组织轻轻漂洗几遍，将需要的实验部位切成2-3mm厚的脑组织块，高尔基染液将脑组织块完全浸没，放置阴凉通风处避光处理14天，浸泡48h后，换一次新染液，之后每隔3天换一次新染液。

　　3、组织块脱水：将组织块取出，置于15%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水约1天，取出组织块，置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2天。

　　4、显影：将组织块取出，蒸馏水洗1min，浓氨水处理45min，蒸馏水洗1min，定影液处理45min，蒸馏水洗1min。

　　5、脱水冰切封片：置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光条件下脱水2-3天，冰冻切片100um，甘油明胶封片，拍照保存结果。

　　6、显微镜镜检，图像采集分析。

　　三、结果判读：

　　神经元呈黑色，胶质细胞呈黑色，背景灰色或者棕黄色。

　　四、注意事项：

　　1、染液配制的量需要根据实际情况来定，配制过多易造成浪费。

　　2、染液一定要避光保存，并且实验过程中的每一步操作都要求避光。

　　3、染色完成后，若客户需要返还组织块，将剩余组织块放在30%的蔗糖中4℃避光运输。